[发明专利]用于临床的修饰的NK-92haNK003细胞

说明书

本文提供了修饰的NK‑92细胞群、包含所述细胞的组合物和试剂盒、以及制备和使用所述细胞群的方法。

背景技术

单克隆抗体(mAbs)的抗癌治疗显著改善了癌症患者的临床结果。治疗性抗体的主要作用机制之一是通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。自然杀伤细胞可用作细胞毒性效应细胞用于基于细胞的免疫疗法，因为它们是ADCC的主要效应细胞。

NK-92是在患非霍奇金淋巴瘤的患者的血液中发现并随后离体永生化的溶细胞性癌细胞系。NK-92细胞衍生自NK细胞，但缺乏正常NK细胞展示的主要抑制性受体，同时保留了大部分激活受体。然而，NK-92细胞不攻击正常细胞，也不会在人体中引发不可接受的免疫排斥反应。NK-92细胞系的表征公开在WO1998/49268和美国专利申请公开号2002-0068044中。NK-92细胞作为治疗某些癌症的潜在治疗剂被评估。

尽管NK-92细胞保留了与NK细胞相关的几乎所有激活受体和细胞溶解途径，但它们在细胞表面上不表达CD16。CD16是Fc受体，其识别并结合抗体的Fc部分以激活NK细胞以用于ADCC效应机制。因为它们缺乏CD16受体，未修饰的NK-92细胞不能通过ADCC机制裂解靶细胞。

发明内容

本文提供了经修饰的NK-92细胞群、包含该细胞的组合物和试剂盒以及制备和使用所述细胞群的方法。

附图说明

图1A是显示haNK003细胞扩增的图。图1B是显示haNK003细胞的群体倍增水平(PDL)的图。在扩增期间监测活力(％)、细胞密度(细胞/mL)和累积PDL。

图2显示了aNK和haNK003细胞中表面标志物表达的代表性直方图。

图3A是显示haNK003细胞对K562细胞的天然细胞毒性的图。图3B是显示haNK003细胞对Raji细胞的天然细胞毒性的图。图3C是显示haNK003细胞对SKOV3细胞的天然细胞毒性的图。图3D是显示haNK003细胞对SKBR3细胞的天然细胞毒性的图。

图4A是显示haNK003细胞对Raji细胞的ADCC的图。图4B是显示haNK003细胞对SKOV3细胞的ADCC的图。图4C是显示haNK003细胞对SKBR3细胞的ADCC的图。

图5是显示辐射的haNK003细胞相对于非辐射的haNK003细胞对K562细胞的天然细胞毒活性的图。haNK003细胞进行模拟辐射(实线)或以10Gy辐射。经辐射的haNK003对K562细胞的细胞毒性活性在辐射后6小时(短划线)或24小时(点虚线)测定。

图6是显示辐射的haNK003相对于非辐射的haNK003细胞对DOHH2细胞的天然细胞毒性活性的图。对haNK003细胞进行模拟辐射(实线)或以10Gy进行辐射。经辐射的haNK003对DOHH2细胞的细胞毒性活性在辐射后6小时(短划线)或24小时(点虚线)测定。注意，对于辐射的细胞未获得E：T比率为20：1的数据点，因为细胞死亡导致haNK003细胞数量不足。

图7是辐射的haNK003细胞相对于非辐射的haNK003细胞对DOHH2细胞的ADCC活性的图。对haNK003细胞进行模拟辐射(实心符号)或以10Gy进行辐射(空心符号)。辐射和非辐射的haNK003对DOHH2细胞的ADCC活性辐射后6小时(短划线)或24小时(点虚线)与Rituxan(正方形)或与赫赛汀(三角形)(其不与DOHH2细胞反应)组合的情况下测定。注意，在24小时时间点对于辐射的细胞未获得E：T比率为20：1的数据点，因为细胞死亡导致haNK003细胞数量不足。