[发明专利]体积排阻色谱用填充剂和其制造方法

说明书

本发明的课题是提供能够以简单的工序制造，即使是小粒径、柱的压力损失也小、适合作为需要大量处理的分取目的的体积排阻色谱用填充剂使用的填充剂、和该填充剂的制造方法。本发明通过含有以下工序的制造方法得到体积排阻色谱用填充剂：将甘油‑1,3‑二甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油基酯在聚合引发剂的存在下聚合的工序；将由得到的共聚物形成的多孔质粒子用糖醇亲水化的工序，以及之后通过无机酸使残留的缩水甘油基开环的工序。

技术领域

本发明涉及用于分取生物体高分子的填充剂。更详细地说，涉及将多糖类、肽、蛋白质、DNA、RNA之类的来自生物体的高分子用水系洗脱液、基于体积排阻色谱的原理进行分离、分取的填充剂。

背景技术

按照分子尺寸的顺序进行分离的体积排阻色谱被广泛用于分离多糖类、肽、蛋白质、DNA、RNA之类的水溶性高分子。体积排阻色谱，尤其是在蛋白质等生物体高分子的分离、分取中，能够在温和的条件下处理生物体高分子，所以具有能够以生物体高分子改性少的状态分离、分取的优点。被分离、分取的生物体高分子在生化反应中应用，或者在食品、制药、化学等工业用途中被使用，近年来市场显著扩大成长。为了满足该需要，需要适合工业规模的、能够进行大量处理的分离、分取用填充剂。特别是作为生物体中含有的抗体的、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)之类的蛋白质，其作为医药品的用途受到关注，迫切需要能够将这样的蛋白质的有效进行分离、分取的填充剂。

在分析用途中，将多种多样的体积排阻色谱用填充剂填充到柱中的填充柱已有销售。在分析用途中使用填充剂粒子具有约3～15μm的平均粒径。这些填充剂，在要分取的生物体高分子的量是少量时，可以作为分取用填充剂使用。但是、为了在工业用规模的大量处理中使用，需要将填充剂填充到大柱中，在这种情况，分析用途的填充剂，由于填充剂的平均粒径过小，所以存在装置受到的背压过高的问题。

另一方面，作为分取用填充剂，已经售卖的填充剂多数情况填充剂的机械强度不充分。这样的填充剂、在平均粒径小时存在机械强度不足、从而造成压密化、柱压力损失上升、容易引起堵塞的问题。因此，市售的大量分取用填充剂例如、主要是作为50μm以上这样平均粒径大的填充剂销售。平均粒径大时，可以在背压不变高的情况下分离、分取大量的生物体高分子。但是、平均粒径大的填充剂，有基于体积排阻的原理的分离性能降低的问题，为了确保分离性能，不得不在低线流速下使用，存在操作长时间化的课题。

作为得到机械强度高的填充剂的技术，已经提出了以下例子等。

专利文献1中公开了在由乙二醇二甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油基酯形成的基材上，在二甲亚砜或1,4-二氧杂环己烷中使乙二醇或甘油等在碱的存在下反应，从而在不发生压密化的情况下得到机械强度充分的多孔质载体。

在导入离子交换基的合成聚合物系的填充剂中、为了赋予高蛋白质的保持容量，专利文献2中公开了在填充剂上以共价键结合被超支化的亲水性多羟基官能性的聚合物。报导了通过该技术，填充剂在化学稳定性和坚固性方面显示了充分的特性。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特开2012-141212号公报

专利文献2:日本特许第4440771号公报

发明内容

发明要解决的课题

像这样，虽然有各种报导，但仍然期待机械强度充分、适合分取的填充剂。特别是期待具有充分的机械强度、即使是10～15μm程度的平均粒径、在填充时柱受到的背压也小的填充剂。

本发明的课题是解决上述看到的问题。更具体地说，本发明的课题是提供能够以简便的工序制造、即使是小粒径、柱的压力损失也小、适合用于需要大量处理的分离、分取目的的体积排阻色谱用填充剂、和该填充剂的制造方法。

解决课题的手段