[发明专利]CD8α+β+细胞毒性T细胞的制备方法在审
| 申请号： | 201880007974.9 | 申请日： | 2018-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN110199017A | 公开（公告）日： | 2019-09-03 |
| 发明（设计）人： | 金子新;河合洋平 | 申请（专利权）人： | 国立大学法人京都大学 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;A61K35/17;A61K35/545;A61P37/02;A61P43/00;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 封新琴 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 日本;JP |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞毒性T细胞 制备 淋巴细胞 获得性免疫系统 细胞免疫疗法 培养基 活化剂 双阳性 有效地 诱导 | ||
1.一种CD8α+β+细胞毒性T细胞的制备方法，包括：
在含有IL(Interleukin)-7及T细胞受体活化剂的培养基中培养CD4CD8双阳性T细胞，以诱导出CD8α+β+细胞毒性T细胞的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述T细胞受体活化剂为抗CD3抗体。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述培养基还包括IL-21及Flt3L(Flt3Ligand)。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，包括：
(a)在含有IL-7及T细胞受体活化剂的培养基中培养CD4CD8双阳性T细胞的步骤；以及
(b)在含有IL-7且不含T细胞受体活化剂的培养基中培养步骤(a)中得到的细胞的步骤。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述培养(b)是使用含有纤连蛋白片段和/或Notch配体的培养器来进行的。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，纤连蛋白片段为重组人纤维连接片段，Notch配体为Delta-like 4(DLL4)。
7.根据权利要求5或6所述的方法，还包括：
(c)使用不含纤连蛋白片段及Notch配体的培养器，在含有IL-7、IL-21及Flt3L的培养基中培养步骤(b)中得的细胞的步骤。
8.根据权利要求7所述的方法，包括：
(a1)在含有IL-7、Flt3L、IL-21及抗CD3抗体的培养基中培养CD4CD8双阳性T细胞的步骤；
(b1)使用含有纤连蛋白片段的培养器，在含有IL-7、Flt3L及IL-21且不含有抗CD3抗体的培养基中培养步骤(a1)中得的细胞的步骤；以及
(c1)使用不含纤连蛋白片段及Notch配体的培养器，在含有IL-7、IL-21及Flt3L的培养基中培养步骤(b1)中得的细胞的步骤。
9.根据权利要求7所述的方法，包括：
(a2)在含有IL-7、Flt3L及抗CD3抗体的培养基中培养CD4CD8双阳性T细胞的步骤；
(b2)使用含有纤连蛋白片段及Notch配体的培养器，在含有IL-7及Flt3L且不含有抗CD3抗体的培养基中培养步骤(a2)中得的细胞的步骤；以及
(c2)使用不含纤连蛋白片段及Notch配体的培养器，在含有IL-7、IL-21及Flt3L的培养基中培养步骤(b2)中得的细胞的步骤。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，不使用饲养细胞来进行所述培养。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，还包括得到的CD8α+β+细胞毒性T细胞的拣选步骤。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述拣选步骤以CD8β阳性、CD5阳性、CD336阴性和CD1a阴性中的一个以上作为指标来进行。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，还包括在含有IL-7、IL-15及IL-21的培养基中扩大培养CD8α+β+细胞毒性T细胞的步骤。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，还包括在含有IL-7和IL-15、以及IL-21、IL-18、IL-12和TL1A中的一种以上的培养基中扩大培养CD8α+β+细胞毒性T细胞的步骤。
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