[发明专利]非编码RNA的电化学传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1. 一种非编码RNA的电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）四氧化三铁纳米微球的制备

把三氯化铁水合物加入到乙二醇中形成澄清溶液，并加入乙酸钠和聚乙二醇，搅拌30~60分钟后，放入水热反应釜中加热反应，冷却到室温后得黑色沉淀，用无水乙醇洗涤沉淀，干燥后得到Fe₃O₄纳米微球；

（2）金纳米粒子负载四氧化三铁纳米复合物的制备

将步骤（1）Fe₃O₄ 纳米微球分散于超纯水中，超声分散均匀后，依次加聚乙二醇400、柠檬酸三钠、氯金酸和抗坏血酸，搅拌，用磁铁分离后得到黑色沉淀，用无水乙醇洗涤后得到Au@Fe₃O₄复合物；

（3）金纳米粒子/磺酸化杯[8]芳烃/还原氧化石墨烯/电信号物质复合物的制备

将4-磺酸杯[8]芳烃水合物、氧化石墨烯分散到去离子水中，超声后调节pH值为7.0 ~12.0，回流反应后，离心，弃去上清液，固体用去离子水洗涤3~4次，得到还原的氧化石墨烯-SCX8复合物；将还原的氧化石墨烯-SCX8复合物分散于去离子水中，超声分散均匀后加入HAuCl₄，搅拌、离心分离后弃去上清液，固体用去离子水洗涤，得到Au@RGO-SCX8复合物；把Au@RGO-SCX8复合物超声分散于去离子水中，然后加入电信号物质，搅拌，离心分离得到沉淀，用去离子水洗涤沉淀，最后得到Au@RGO-SCX8-电信号物质复合物；

（4）电化学传感器的构建

将Au@Fe₃O₄复合物超声分散在缓冲液Ⅰ中，并加入捕获探针，在4℃的条件下放置5~20小时，磁铁分离，然后在固体中加入缓冲液Ⅰ和己硫醇，固体在缓冲液Ⅰ中的浓度为0.5~3 mg/mL，己硫醇用来封闭非特异性位点，室温放置10~40 min后，用磁铁分离，在分离后固体中加入缓冲液Ⅱ和浓度范围在10^-18 ~10^-9 mol/L的目标RNA，分离后固体在缓冲液Ⅱ中的浓度是0.5~5 mg/mL；室温下放置1~2小时后磁铁分离，在分离的固体中依次加入信号探针、辅助探针和Au@RGO-SCX8-电信号物质复合物分散液，室温下放置1~2小时后磁铁分离，将固体分散在磷酸缓冲液中，取分散液滴于丝网印刷电极表面，并在电化学工作站上用示差脉冲伏安法、循环伏安法或交流伏安法确定目标RNA的浓度和峰电流的关系，并获得电流强度与RNA浓度的标准曲线，进而完成电化学传感器的构建；

所述步骤（4）中Au@Fe₃O₄复合物在缓冲液Ⅰ中的浓度为0.5~3 mg/mL，捕获探针在缓冲液Ⅰ中浓度为0.5~10 μmol/L，己硫醇在缓冲液Ⅰ中浓度为1~5 mmol/L；

信号探针和辅助探针的初始浓度均为10~20 μmol/L，每1 mg分离的固体中各添加100~150 μL的信号探针和辅助探针；Au@RGO-SCX8-电信号物质复合物分散液的浓度为1~5 mg/mL，每1 mg分离的固体中添加1~1.5 mL的Au@RGO-SCX8-电信号物质复合物分散液。

2.根据权利要求1所述的非编码RNA的电化学传感器的制备方法，其特征在于：步骤（1）中三氯化铁在乙二醇中的质量体积浓度为0.2%~0.5%，水热反应是在120~220℃下反应5~10小时，干燥是在60~100℃下处理6~10小时，乙酸钠与三氯化铁的质量比为3~6:1，聚乙二醇与三氯化铁的质量比为1:2~3:1。

3.根据权利要求1所述的非编码RNA的电化学传感器的制备方法，其特征在于：步骤（2）中聚乙二醇400、柠檬酸三钠、氯金酸、抗坏血酸的在超纯水中的浓度分别为0.10~0.25 mg/mL、1~5 mg/mL、2~6 mg/mL、1~6 mg/mL。

4.根据权利要求1所述的非编码RNA的电化学传感器的制备方法，其特征在于：步骤（3）中4-磺酸杯[8]芳烃水合物和氧化石墨烯在去离子水中的质量浓度均为0.1%~0.5%；HAuCl₄在还原的氧化石墨烯-SCX8复合物分散液中的质量浓度为1%~5%。