[实用新型]一种基于磁珠的检测分型试剂盒

说明书

本实用新型公开了一种基于磁珠的检测分型试剂盒，包括微孔板、微孔板盖、主电磁吸盘、磁珠试剂瓶和荧光标记试剂瓶；微孔板盖上设置有与微孔的内径匹配的环形凸起；微孔板与微孔板盖被设置为可放置入PCR仪中，起到代替PCR管和PCR架的作用；磁珠试剂瓶中设置有m种连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠，m>1；荧光标记试剂瓶中设置有m种5’端带有不同的荧光标记的反向引物；m种连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠和m种5’端带荧光标记的反向引物一一对应地组成引物对用于PCR或RT‑PCR扩增。本实用新型将磁珠、荧光标记和PCR/RT‑PCR相结合，实现了高通量、快速、灵敏地对病毒亚型进行分型检测。

技术领域

本实用新型属于生物技术检测领域，尤其涉及一种基于磁珠的检测分型试剂盒。

背景技术

甲型流感病毒为常见流感病毒，非常容易发生变异，因此有很多甲型流感病毒亚型。这些亚型则被人们称为“禽流感”。甲型流感对人类致病性高，曾多次引起世界性大流行。甲型流感病毒中至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：甲型H1N1、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N8。其中H1、H5、H7亚型为高致病性，H1N1、H5N1、H7N9尤为值得关注。因此非常有必要对甲型流感病毒亚型H1N1、H5N1、H7N9进行检测。目前对于这几种亚型上没有很好的检测方法。

除甲型流感病毒外，人乳头瘤病毒(HPV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)等也都存在多种亚型。如何对这些亚型进行有效的快速的分型，十分必要。

实用新型内容

本实用新型的目的就是提供一种能快速、高效分析病毒分型的试剂盒。其原理是利用磁珠上的正向引物和5’端带荧光标记的反向引物特异性地扩增特定的基因片段。通过磁性吸附保留磁珠及结合在磁珠上面的特定基因片段。该扩增出的基因片段是仅特异性地存在于一种病毒亚型中的。通过检测扩增产物所携带的荧光信号，来确定病毒亚型。

具体方案是：一种基于磁珠的检测分型试剂盒，包括微孔板、与微孔板匹配的微孔板盖、可拆卸地设置在微孔板底部的主电磁吸盘、磁珠试剂瓶和荧光标记试剂瓶；微孔板包括多个微孔；微孔板盖上设置有与微孔的内径匹配的环形凸起；微孔板与微孔板盖被设置为可放置入PCR仪中，起到代替PCR管和PCR架的作用；磁珠试剂瓶中设置有m种连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠，m>1；荧光标记试剂瓶中设置有m种5’端带荧光标记的反向引物，且不同的反向引物带有不同的荧光标记；m种连接有磁珠连接正向引物的羧基磁珠和m种5’端带荧光标记的反向引物一一对应地组成引物对用于聚合酶链式反应(PCR)或反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增。

磁珠连接正向引物由5’端的连接分子和3’端的核心引物组成，其中连接分子为-NH₂-(CH₂)n-，n＝4-8；核心引物为5’端带有多聚T的特异性正向引物。

进一步地，还包括辅助引物试剂瓶。所述辅助引物试剂瓶中设置有辅助引物；所述辅助引物为特异性正向引物，即其序列为核心引物去掉5’端的多聚T之后的序列。

进一步地，还包括PCR/RT-PCR试剂。PCR/RT-PCR试剂为市售的PCR/RT-PCR试剂。

进一步地，微孔的孔壁突出于微孔与相邻微孔之间的第一连接区域以及微孔与微孔板侧壁之间的第二连接区域。

进一步地，微孔板盖的顶面可拆卸地设置有辅电磁吸盘。

进一步地，还包括盒体。

进一步地，还包括与盒体的内壁贴合的支架；支架上设置有微孔板槽、微孔板盖槽、主电磁吸盘槽、辅电磁吸盘槽、磁珠试剂瓶槽和荧光标记试剂瓶槽。

进一步地，支架上还设置有PCR/RT-PCR试剂槽、辅助引物试剂瓶槽。