[实用新型]三维细胞培养板

说明书

本实用新型公开一种三维细胞培养板，包括生长板、储液板以及盖板，生长板上均匀设有穿透生长板且包括上孔和下孔的培养孔，一个上孔的底部通过连接管与至少两个下孔连通，生长板底部靠近下孔出口的边缘涂有亲水涂层或疏水涂层。本实用新型提供的三维细胞培养板，可直接在下孔处形成悬滴，无需要使用支架介质且无需经过反转使液滴面向下，降低了细胞培养成本，并能防止加液坠滴并控制悬滴的形状或大小，易于形成悬滴，可操作性强；且于一个上孔中添加细胞悬液即在多个下孔中形成悬滴，同时收获细胞时只需要用微量加样器把悬滴吹到储液板中方便又快捷，提高了操作效率。

技术领域

本实用新型涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种三维细胞培养板。

背景技术

3D类器官是一种让细胞形成微组织的体外培养技术，其形态和功能与生理状态下更加类似，自2009年由荷兰Hans Clevers实验室首先培养出小肠类器官的绒毛和隐窝结构以来，已广泛应用到各正常组织和肿瘤的体外长期培养。但目前通用的类器官培养方法需要添加支架介质将细胞包埋，如基底膜抽提物，培养成本较高，且来源于小鼠肉瘤，用于再生医学有一定安全风险，因此以滴细胞培养方法为主的3D细胞培养方法快速发展，但目前悬滴的形成多采用手工法，即先将细胞悬液滴在平板(如细胞培养皿的盖，由塑料或玻璃材料制成)上，然后小心反转，使液滴面向下，液滴借重力下垂，这种操作需要经验丰富否则反转过程中液滴会彼此融合。

此外，由于体外培养的细胞需要理想的气体环境，氧和二氧化碳是细胞生存必须的条件之一。氧参加细胞的三羧酸循环，产生能量以供给细胞生长、增殖和合成各种所需成分。有些细胞在低氧条件下，可借糖酵解取得能量，但多数细胞低氧时不能生存。CO₂既是细胞的代谢产物，又是细胞生长所必需的成分，并与维持培养液的pH有关，一般要把细胞置于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中，而采用悬滴法使细胞悬液直接悬空附着在孔下方，处于完全裸露状态，在培养或者转移过程中容易被污染，若直接在悬滴下方放置标准的96孔板，悬滴所处的空间几乎接近于密封盖合，使得细胞的生长环境容易出现低氧以及二氧化碳低于细胞生长所需的浓度要求，造成细胞生长速度慢，严重会出现细胞大范围损伤，为实验研究带来严重的损失。另外，由于实验的培养数量要求，目前已有的培养孔通常为96孔，甚至384孔或1536孔，如此挨个孔单独添加细胞悬液非常耗时，降低了实验效率。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种无需反转即可形成悬滴、能为细胞生长提供足够的氧气且能提高细胞悬液添加效率的三维细胞培养板以解决现有技术的不足。

为达此目的，本实用新型采用以下技术方案：

一种三维细胞培养板，包括生长板、储液板以及覆盖在所述生长板顶部的盖板，所述生长板上均匀设有穿透所述生长板且包括上孔和下孔的培养孔，一个所述上孔的底部通过连接管与至少两个下孔连通，所述连接管的孔径为所述上孔入口处孔径的1/4-1/5，所述下孔出口处的孔径小于或等于所述上孔的孔径，所述生长板底部的四个边缘分别设有凸出于所述下孔所在平面的凸板，所述储液板顶部的四个边缘设有与所述凸板相卡合的凹槽,所述生长板底部靠近所述下孔出口的边缘涂有亲水涂层或疏水涂层。

上述技术方案中，生长板上均匀设有穿透生长板且包括上孔和下孔的培养孔，有利于细胞悬液的悬滴生成避免贴壁；生长板底部的凸板与储液板顶部的凹槽相卡合合叠放更加方便快捷同时使摆放平稳有利于细胞的生长；而通过在下孔出口的边缘处涂覆亲水涂层或疏水涂层可以调整悬滴的大小和形状。

进一步地，所述上孔的开口上宽下窄且两侧壁均呈圆弧状，所述下孔上窄下宽且侧壁均呈圆弧状，所述连接管包括至少两根支管，所述下孔的数量与所述支管的数量相等。上孔和下孔的两侧壁均成圆弧状有利于提高表面张力，使悬滴更容易悬挂在下孔的底部而不掉落，而支管将上孔与两个、三个或四个下孔同时连通，由上孔添加一次细胞悬液即可同时在下孔下方形成多个悬滴，大大提高了细胞悬液的添加效率。