[实用新型]一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒

说明书

本实用新型公开了一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，包括盒体、试剂架和盖体，所述盒体的内部固定有试剂架，试剂架上的一侧分别设有一个组织清洗液放置区、一个细胞洗涤液放置区以及两个细胞培养液放置区，试剂架上的另一侧分别设有一个骨髓冲洗液放置区、一个细胞分离液放置区、一个红细胞裂解液放置区、一个接种包被液放置区、一个细胞消化液放置区。本实用新型提供了大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养过程中涉及到的所有试剂，并且提供了一套经过反复优化的细胞分离、培养方案，实验人员可参照优化的实验方案、使用试剂盒内的试剂简便、快速地完成大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养实验。

技术领域

本实用新型涉及生物技术领域，具体为一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒。

背景技术

内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells，EPCs)是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞(Angioblast)，在生理或病理因素刺激下，可从骨髓动员到外周血参与损伤血管的修复。1997年，Asahara等首次证明循环外周血中存在能分化为血管内皮细胞的前体细胞，并将其命名为血管内皮祖细胞。EPCs是一群具有游走特性，能进一步增殖分化的幼稚内皮细胞，缺乏成熟内皮细胞的特征性表型，其功能主要为参与了出生后缺血组织的血管发生和血管损伤后的修复。研究显示，EPCs在血管再生和心血管疾病的细胞治疗和基因治疗中具有广阔的应用前景。例如，利用EPCs修复心肌梗死患者的心脏，治疗Ⅰ临床肢体缺血，治疗冠状动脉疾病，改善血管移植物的通畅率，改善糖尿病患者的血管形成能力，定向抑制肿瘤血管生成，作为基因治疗导向载体和靶细胞，等等，并为缺血性疾病的研究治疗提供了新思路，EPCs生物学特性和治疗作用的研究成为这一领域新的热点。

内皮祖细胞主要存在于骨髓、脐血和外周血等组织中，三者内皮祖细胞含量之比约为15:10:1；其中，外周血内皮祖细胞占外周血细胞比例约为0.01%，骨髓来源内皮祖细胞在骨髓中的比例仅为0.1-0.15%，含量极少。众多来源的内皮祖细胞中，骨髓来源内皮祖细胞应用相对广泛，由于骨髓采集方便、易于获取，备受实验研究人员的亲睐。目前，关于EPCs分离、培养的方法过程繁复，研究人员实验前后需要准备的试剂、耗材很多，且最终细胞得率较低；极大地耗损了实验人员的精力，并无形中延长了整个实验研究周期，给相关实验人员带来了不便。

发明内容

本实用新型的目的在于为了解决骨髓来源内皮祖细胞分离、培养过程中，耗时长、成本高、效率低等技术问题，本实用新型提供了一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，该试剂盒中所有试剂均为无菌，可供实验人员方便、快捷使用，大大缩短了细胞分离前期试剂配制及准备工作所消耗的时间。

为实现上述目的，本实用新型提供如下技术方案：一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，包括盒体、试剂架和盖体，所述盒体的内部固定有试剂架，试剂架上的一侧分别设有一个组织清洗液放置区、一个细胞洗涤液放置区以及两个细胞培养液放置区，试剂架上的另一侧分别设有一个骨髓冲洗液放置区、一个细胞分离液放置区、一个红细胞裂解液放置区、一个接种包被液放置区、一个细胞消化液放置区。

优选的，所述试剂架为泡沫材料制备的支架。

优选的，所述组织清洗液放置区内放置有一个盛放100mL组织清洗液的无菌、密封塑料方瓶，且组织清洗液主要由磷酸盐缓冲液、青-链霉素组成。

优选的，所述骨髓冲洗液放置区内放置有一个盛放50mL骨髓冲洗液的无菌、密封试剂瓶，且骨髓冲洗液主要由DMEM/F12基础培养基、青-链霉素组成。

优选的，所述细胞分离液放置区内放置有一个盛放50mL细胞分离液的无菌、密封试剂瓶，且细胞分离液主要由Percoll组成。

优选的，所述红细胞裂解液放置区内放置有一个盛放50mL红细胞裂解液的无菌、密封试剂瓶，且红细胞裂解液主要由KHCO₃、NH₄Cl、EDTA-Na₂组成。