[实用新型]一种用于卵母细胞玻璃化冷冻的装置

说明书

本实用新型公开了一种用于卵母细胞玻璃化冷冻的装置。本实用新型提供的装置包括N个结构单元；每个结构单元均为由侧壁和下底面组成的中空腔体；腔体内由分隔壁分隔为两个容置腔；分隔壁采用双层结构，一层为微孔滤膜(1)，另一层为可抽取式隔水板(2)。使用方法：①在一个容置腔放入1体积份溶液甲，在另一个容置腔放入1体积份溶液乙，将卵母细胞放入容置腔中，抽出可抽取式隔水板，静置10‑15min；②取出卵母细胞，放入含15％的乙二醇和15％的二甲基亚砜的溶液中，45s内将卵母细胞投入到液氮。本实用新型提供的装置，可以实现乙二醇和二甲基亚砜自动线性浓度变化，将极大的方便胚胎实验员的操作，有利于提高卵子质量。

技术领域

本实用新型涉及一种用于卵母细胞玻璃化冷冻的装置。

背景技术

卵母细胞是人体内最大的细胞，成熟的卵母细胞直径100μm左右。卵母细胞的冷冻保存能够帮助癌症患者保存生育能力、实现卵子库的建立，具有非常重要的临床意义。然而，由于体积比较大，卵母细胞冷冻-复苏后的发育能力受到很大的影响，其效果远不如胚胎的冷冻复苏。

玻璃化冷冻法是目前认为最有效的卵母细胞冷冻方法。主要包括两个步骤：(1)将卵母细胞放入含有7.5％EG和7.5％DMSO的溶液中，常温下平衡10-15min(进入上述溶液后，卵母细胞瞬间失水皱缩，然后随着EG和DMSO缓慢进入卵母细胞由皱缩变饱满；从将卵母细胞放入含有7.5％EG和7.5％DMSO的溶液开始计时，第5s的照片、第3min的照片和第10min的照片见图1)；(2)将卵母细胞放入含15％EG和15％DMSO的溶液中(卵母细胞再次皱缩)，然后在45s内将卵母细胞投入到液氮中。该方法是通过有机物质置换出细胞中的水分子，有效的避免降温时冰晶的形成，从而避免冰晶对细胞的损伤。

玻璃化冷冻复苏后的卵母细胞目前面临问题是，复苏成功率高但卵母细胞质量受到影响，包括后期的胚胎发育受到影响。可能的原因如下：(1)卵母细胞比较大，胞浆丰富，有机物质不能充分置换；(2)较大的细胞皱缩可能会对卵母细胞内的物质结构产生影响；(3)瞬间的失水可能对卵母细胞内的结构以及成份造成影响和破坏；(4)卵母细胞处于减数分裂的特殊时期导致。如何减少玻璃化冷冻对卵母细胞的伤害引起研究人员的思考。

有人通过引流法，逐渐增加冷冻保护剂的浓度，从而减少卵母细胞骤然皱缩对其质量的影响。引流法采用的装置的示意图见图2。装置包括容器A、容器B、容器C、容器D、容器E和引流管。容器A中放置细胞培养液，容器B、容器C、容器D和容器E中均装有含7.5％EG和7.5％DMSO的细胞培养液。使用步骤如下：①将卵母细胞放置于容器A中，将容器A与容器B通过引流管连通2min，然后关闭连通；②完成①后，将容器B与容器C通过引流管连通2min，然后关闭连通；③完成②后，将容器C与容器D通过引流管连通2min，然后关闭连通；④完成③后，将卵母细胞转移至容器E，放置5min。完成上述步骤后，将卵母细胞放入含15％EG和15％DMSO的溶液中(卵母细胞再次皱缩)，然后在45s内将卵母细胞投入到液氮中。采用上述装置进行玻璃化冷冻复苏，需要实验员反复设定时间和关注，一方面时间控制很难准确，很难实现标准程序化，另一方面在实际的临床操作中，细胞数目多的情况下耗费体力和精力。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种用于卵母细胞玻璃化冷冻的装置。

本实用新型提供了一种用于卵母细胞玻璃化冷冻的装置，其特征在于：它包括N个结构单元，N为1以上的自然数；每个结构单元均为：由侧壁和下底面组成的中空腔体；腔体内由分隔壁分隔为两个容置腔；所述分隔壁采用双层结构，一层为微孔滤膜1，另一层为可抽取式隔水板2。

所述微孔滤膜的孔径为0.1μm。

所述微孔滤膜的厚度为30μm。

微孔滤膜为由PTFE制成的微孔滤膜。

微孔滤膜为由亲水PTFE制成的微孔滤膜。

所述分隔壁为直板状结构。