[发明专利]一种替度鲁肽的合成方法

权利要求书

1.一种替度鲁肽的合成方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

以替度鲁肽序列的第2-3位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第5-6位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第22-23位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Asn-Thr(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第27-28位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH；或者以替度鲁肽序列的第29-30位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH；

按顺序依次固相合成替度鲁肽序列的其他位点氨基酸，合成全保护替度鲁肽，经裂解沉淀，得到替度鲁肽；

裂解采用的裂解试剂为：TFA:PhSMe:EDT:TIS:H₂O:Phenol= 80:5:5:5:3:2；

合成方法的具体步骤如下：

（1）Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备

取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH ，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4－6h；抽干，加入DMF 洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4－0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；

取Fmoc-Ile-Thr(pro-me-me)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应0.5－1.5h，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；

重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；

（2）裂解

配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H₂O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4－0.6h后恢复至室温继续反应1.5－2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀，干燥即得替度鲁肽粗肽；

或者，合成方法的具体步骤如下：

（1）Fmoc-Gln(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备：

取Wang树脂加入到固相反应器中，加入 DCM溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4－6h；抽干，加入DMF 洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4－0.6h；加入DMF洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；

取Fmoc-Thr(tBu)-OH ，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；

重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；

（2）裂解

配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H₂O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4－0.6h后恢复至室温继续反应1.5－2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥即得替度鲁肽粗肽；

或者，合成方法的具体步骤如下：

（1）Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备

取Wang树脂加入到固相反应器中，加入DCM溶胀树脂0.4-0.6h；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入的DMAP，搅拌反应4－6h；抽干，加入DMF洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4－0.6h；加入DMF 洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护；抽干，加入DMF 洗涤；茚检结果呈阳性；

取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；

重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；

（2）裂解

配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H₂O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4－0.6h后恢复至室温继续反应1.5－2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥后即得替度鲁肽粗肽；

或者，合成方法的具体步骤如下：

（1）Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备

取Wang树脂加入到固相反应器中，加入 DCM溶胀树脂0.4-6h；抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC ，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4-6h；抽干，加入DMF 洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4-0.6h；加入DMF 洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护，反应，抽干，加入DMF洗涤；茚检结果呈阳性；

称取Fmoc-Thr(tBu)-OH，HOBt ，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；

重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；

（2）裂解

配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H₂O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.5-0.6h后恢复至室温继续反应1.5-2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥后即得替度鲁肽粗肽；

或者，合成方法的具体步骤如下：

（1）Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH替度鲁肽肽树脂的制备

取Wang树脂加入到固相反应器中，加入 DCM溶胀树脂，抽干溶剂，加入Fmoc-Asp(Otbu)-OH，HOBT，DIC，DMF溶液，冰浴活化，活化温度不超过10摄氏度，活化液加入反应器后加入DMAP，搅拌反应4－6h；抽干，加入DMF 洗涤，加入1：1吡啶/乙酸酐溶液，封闭0.4－0.6h；加入DMF 洗涤；加入哌啶/DMF溶液脱保护，抽干，加入DMF 洗涤；茚检结果呈阳性；

取Fmoc-Thr(tBu)-OH ，HOBt ，DIC，加入DMF溶解，冰浴活化；将活化后的溶液加入到反应器中，反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入DMF洗涤；

重复以上步骤，按照氨基酸序列Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asn(Trt)-Thr(pro-me-me)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Phe-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Gly-Ser(pro-me-me)-OH、Fmoc-Asp(otBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-His(Trt)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥，得到替度鲁肽肽树脂；

（2）裂解

配制裂解试剂为TFA:PhSMe:EDT:TIS:H₂O:Phenol= 80:5:5:5:3:2，冰浴条件下加入替度鲁肽肽树脂，0.4－0.6h恢复至室温继续反应1.5－2.5h，反应结束后，加入无水乙醚沉淀；离心沉淀；干燥即得替度鲁肽肽树脂粗肽。