[发明专利]人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白定量检测卡及其临床应用

说明书

本发明涉及人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白定量检测卡及其临床应用。本发明制备了多种抗体，并进行配对筛选，获得灵敏度及特异性均能满足定量检测卡需求的一组抗体组合(NG02及NG19)；同时其方便大量生产，可满足日后大规模临床应用的需求。对上述抗体组合进行检测体系的调试优化工作，获得操作简便，灵敏度，特异性及相关检测性能可满足人血液或尿液样本检测的人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的胶体金免疫层析定量检测卡。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的涉及两种抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体及其制备方法以及上述抗体在人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白定量检测中的应用。

背景技术

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associatedlipocalin,NGAL)，又称载脂蛋白-2(Lipocalin-2)，属于lipocalin超家族的成员，是一种相对分子质量为25kDa的分泌型糖蛋白。在一系列临床研究中，已证明NGAL对于急性肾损伤具有诊断和评估预后的价值。目前，NGAL是诊断急性肾损伤的重要标志物。发生急性肾损伤时血、尿NGAL的水平均升高。因此，尿和血中NGAL检测可作为诊断急性肾损伤的早期、敏感且极具特异性的生物学标志物。

NGAL的检测最初采用免疫印迹法(Western Blot)，但由于该方法灵敏度和精密度低、操作复杂、重复性差等缺点现在已很少用于NGAL的定量研究。2005年丹麦BioPorto公司首先推出酶联免疫吸附法(ELISA)商品试剂盒，可用于血清(浆)、尿液的NGAL检测，标本量需100μL，检测周期约4h，检测限达到0.1ng/mL。随后，有适用于全自动免疫分析仪的分析系统面世，如美国雅培公司的Architect i2000SR全自动免疫分析仪测定尿液NGAL(化学发光微粒子免疫分析法)，标本量需150μL，检测周期约28h。化学发光法灵敏度虽高，但测定线性范围较小且检测成本较高，需要特定仪器，难以在临床上普及应用；美国博适公司的Triage分析仪检测EDTA抗凝血浆或全血(双抗体夹心免疫荧光层析法)，15h即可完成NGAL的测定，检测范围50～2000ng/mL。这些检测系统只能单一的检测尿液或者血浆，且标本用量大，检测周期长，检测范围窄，限制了其在临床的常规应用。

本试剂盒采用胶体金法，该法快速、简便，易操作，自动化程度高，且与ELISA法、免疫比浊法等均具有很好的相关性，临床应用非常广泛，与其他方法检测试剂比较，通用性较强。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一组能有效的、特异性结合人NGAL的抗体对。

本发明的第一目的在于提供两种抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体。

第一种抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体(NG02)，

其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和/或如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

优选的是本发明中NG02抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

第二种抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体(NG19)，

其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：9所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：10所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：11所示的HCDR3；