[发明专利]PD-1抗体检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种PD‑1抗体检测试剂盒，其包括PD‑1抗原和第二抗体，所述试剂盒以“支持物‑PD‑1抗原‑PD‑1抗体‑第二抗体‑标记物”形式完成检测，优选地，所述PD‑1抗体包括IgG4Fc。)本发明提供的PD‑1抗体检测试剂盒检测特异性强，灵敏度高，稳定性好。能有效的捕获细胞分泌的PD‑1抗体，实现对细胞分泌的PD‑1抗体的有效检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测领域，具体而言，涉及一种PD-1抗体检测试剂盒。

背景技术

程序性死亡分子1(programmed death-1,PD-1)，也称CD279，是一种分子量在50-55kD的跨膜糖蛋白，主要表达与激活的T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞等免疫细胞表面，在健康状态下，其正常功能是下调不需要的或过度的免疫反应，包括自身免疫反应。PD-1是免疫球蛋白(Ig)超家族成员，现已证实PD-1与其配体(PD-L1和/或PD-L2)结合时，可负性调节抗原受体信号。作为T细胞的负性调控因子，PD-1与其配体PD-L1/PD-L2一同参与T细胞免疫过程。已有大量研究证实，PD-1在体内炎症和肿瘤免疫过程中发挥重要作用。PD-1/PD-L1调节轴在人体T细胞活化控制与机体免疫耐受维持中发挥关键作用，因此也被肿瘤细胞以及慢性病毒感染中所利用。虽然正常的器官仅能少量表达PD-1，但已有研究证实各种肿瘤细胞可大量表达这种T细胞的抑制剂。PD-1/PD-L1调节轴已被证实促进T细胞耗竭，肿瘤或病毒诱导的PD-1/PD-L1信号通路也可通过多种机制来实现宿主免疫监视的逃逸，包括促进T细胞失活、衰竭、反应迟钝和细胞凋亡，诱导Treg细胞扩增，以及增强肿瘤内在性抵抗杀伤和凋亡的能力。通过癌细胞介导的PD-1和PD-L1相互作用导致肿瘤浸润淋巴细胞减少，T细胞增殖抑制，并增加免疫逃逸(Topalian SL等，Cancer Cell，2015)。现已发现肿瘤细胞中PD-L1的高表达(PD-L2的水平较低)与各种肿瘤的不良预后和生存相关，包括肾细胞癌、胰腺癌、肝细胞癌、卵巢癌和非小细胞肺癌。此外，研究还发现PD-1可调节黑色素瘤患者体内肿瘤特异性T细胞的扩增。这表明PD-1/PD-L1通路在肿瘤侵袭中起到一个重要的作用，因而是一个备受瞩目的治疗干预靶点。

目前，有5种针对PD-1/PD-L1的抗体已获得了美国食品和药物管理局批准，分别为抗PD-1抗体(Pembrolizumab和Nivolumab)、抗PD-L1抗体(Atezolizumab，Avelumab及Durvalumab)。但PD-1抗体在临床应用中仍然存在一些不可避免的问题。一方面由于PD-1单抗是静脉注射全身用药，大多数接受PD-1抗体阻断治疗的患者都会出现不同程度的药物毒副作用。另一方面PD-1单抗的生产涉及复杂的生产制备与纯化工艺，成本高，导致治疗费用昂贵。

近年来将嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)治疗技术与免疫检查点的阻断联用，如与PD-1抗体的联用成为越来越受关注的一种治疗手段。但PD-1抗体在临床应用中仍然存在一些不可避免的问题。一方面由于PD-1单抗是静脉注射全身用药，大多数接受PD-1抗体阻断治疗的患者都会出现不同程度的药物毒副作用。并且大分子抗体对实体瘤的穿透力不足，全身用药具有较大的毒副作用，且药物成本很高。分泌免疫检查点抗体的CAR-T细胞，如分泌PD-1抗体的CAR-T细胞，成为克服上述治疗方案缺陷的一种选择。对于自表达PD-1抗体的免疫效应细胞如CAR-T细胞，其自身的PD-1抗体的表达水平对肿瘤杀伤的效果至关重要。因此目前仍然需要有效的检测手段检测PD-1抗体的表达。

发明内容

本发明的所要解决的技术问题是为了解决目前需要PD-1抗体表达水平的检测方法，提供了一种PD-1抗体检测试剂盒，选用PD-1抗原蛋白和第二抗体进行检测，检测特异性强，灵敏度高，稳定性好。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：