[发明专利]脐血血浆精华液或其冻干粉剂的制备方法

权利要求书

1.制备脐血血浆精华液及其冻干粉剂的方法，该方法包括如下步骤：

(1)提供于产前当天采集的产妇外周血置于采血管中，提供生产时采集的新鲜脐血置于血袋中，运回实验室待处置；

(2)外周血进行病毒检测，以确保脐血样本的安全性；

(3)从血袋中抽出脐血样本，将其与生理盐水以1：0.8~1.3体积比稀释，充分混匀；

(4)将ficoll分离液加至离心管中，缓慢加入0.6~1.2倍体积的步骤(3)所得脐血稀释液，1500~2500rpm转速下以加速度1、减速度0离心10~20min，脐血分成三层；所述ficoll分离液是用聚蔗糖和泛影葡胺配制的混合物，其比重为1.077±0.005，并且其中还额外添加重量/体积百分比为0.02~0.03%的乳果糖；

(5)缓慢抽取上层血浆，取适量用于微生物检测，其余任选的置于-50℃以下冷冻保存，分离得到脐血血浆；另外依次分别缓慢吸出中间层、分离液层和下层，另行处理；

(6)取上一步骤所得脐血血浆，37℃水浴解冻至常温；

(7)向脐血血浆中添加浓度为20%的CaCl₂溶液，CaCl₂溶液与脐血血浆的体积比为1：8~12，37℃摇床培养箱中100rpm振荡孵育30min，4000G离心10分钟，去纤维蛋白沉淀，收集上清；

(8)向所得上清中添加浓度为20%的CaCl₂溶液，CaCl₂溶液与上清的体积比为1：8~12，37℃摇床培养箱中100rpm振荡孵育24h，4000G离心10分钟，去纤维蛋白沉淀，收集上清，得透明澄清的脐血血浆精华液；使其冷冻干燥制成脐血血浆精华液冻干粉剂。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤(5)中，缓慢抽取上层血浆，取适量用于微生物检测，其余置于-80℃冷冻保存，分离得到脐血血浆；另外依次分别缓慢吸出中间层、分离液层和下层，另行处理。

3.根据权利要求1的方法，其中步骤(6)中将上一步骤所得脐血血浆预先进行病毒检测和微生物检测，且结果均呈阴性。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤(7)中，CaCl₂溶液与脐血血浆的体积比为1：10。

5.根据权利要求1的方法，其中步骤(8)中，CaCl₂溶液与上清的体积比为1：10。

6.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)中，所述病毒包括HIV、HCV、HTLV。

7.根据权利要求1的方法，其中步骤(3)中，将脐血样本与生理盐水以1：1体积比稀释，充分混匀。

8.根据权利要求1的方法，其中步骤(4)中，加入0.8~1.0倍体积的步骤(3)所得脐血稀释液。

9.根据权利要求1的方法，其中步骤(4)中，2000rpm离心15min离心。

10.根据权利要求1的方法，其中额外添加的乳果糖的重量/体积百分比为0.025%。