[发明专利]His-AGR2-DsRed融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种His‑AGR2‑DsRed融合蛋白及其制备方法和应用。可以简便、高效地获得具有活性的人源AGR2，有利于对his‑AGR2‑DsRed重组蛋白进行生物学功能和临床应用研究，特异性强；因DsRed可直接发光，不需再加任何辅助因子，操作简便，且灵敏度高，重复性好；结合荧光成像技术可以指示蛋白的定位，用于相关机制研究；结合流式细胞检测分析技术可以用于检测该蛋白及表达在细胞表面的抗AGR2抗体的结合情况，从而用于抗AGR2真核细胞抗体库的筛选；由于采用大肠杆菌生产本发明融合蛋白，其生产成本低廉；所采用的的改进后的pMAL系统，使用的his标签既能最小化标签对蛋白结构和功能的影响，且使纯化过程简便经济，还提高了目的蛋白的纯度表达量。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种His-AGR2-DsRed融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

前梯度蛋白2(Anterior gradient protein 2，AGR2)是一种在人体中由AGR2基因表达的蛋白，其是XAG-2在人体内的同源物。AGR2在分泌粘液的组织和内分泌器官包括肺、胃、结肠、前列腺和小肠中有高表达量。AGR2的表达受到雄激素和雌激素的调节。AGR2蛋白是一种蛋白二硫键异构酶，在蛋白折叠中起重要作用。人源AGR2最早发现于雌激素受体阳性乳腺癌细胞。后来的研究显示AGR2在食管腺癌，胰腺癌和前列腺癌中都存在过表达。在人体内AGR2蛋白的高表达会引起肿瘤抑制蛋白p53下调、血管内皮生长因子VEGF和纤维母细胞生长因子FGF2活性增强，促血管生成和成纤维细胞协调肿瘤细胞侵袭，与肿瘤细胞形成和迁移有关。获得具有活性的人源AGR2蛋白对于进一步研究其生物学功能及临床应用具有重要的理论和实际意义。现有技术尚不能直观地显示和AGR2相结合的受体分布，对于抗AGR2抗体库也没有一种方便易行的评价手段。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种His-AGR2-DsRed融合蛋白及其制备方法和应用，以获得具有活性和红色荧光的人源AGR2，从而可以进一步使用荧光技术方便地研究人源AGR2的生物学功能和临床应用。

本发明的第一方面提供一种融合蛋白，为His-前梯度蛋白2红色荧光蛋白融合蛋白，即 His-AGR2-DsRed融合蛋白。

进一步的，所述融合蛋白中，所述前梯度蛋白2(AGR2)的氨基酸序列如SEQ IDNO.1 所示：

RDTTVKPGAKKDTKDSRPKLPQTLSRGWGDQLIWTQTYEEALYKSKTSNKPLMIIHHL DECPHSQALKKVFAENKEIQKLAEQFVLLNLVYETTDKHLSPDGQYVPRIMFVDPSLTVRA DITGRYSNRLYAYEPADTALLLDNMKKALKLLKTEL，SEQ ID NO.1。

进一步的，.所述融合蛋白中，所述红色荧光蛋白(DsRed)的氨基酸序列如SEQ IDNO.2 所示。MDNTEDVIKEFMQFKVRMEGSVNGHYFEIEGEGEGKPYEGTQTAKLQVTKGGPLPFAWDI LSPQFQYGSKAYVKHPADIPDYMKLSFPEGFTWERSMNFEDGGVVEVQQDSSLQDGTFIYK VKFKGVNFPADGPVMQKKTAGWEPSTEKLYPQDGVLKGEISHALKLKDGGHYTCDFKTV YKAKKPVQLPGNHYVDSKLDITNHNEDYTVVEQYEHAEARHSGSQ，SEQ ID NO.2。

进一步的，所述His连接于前梯度蛋白2的N端，所述红色荧光蛋白连接于前梯度蛋白 2的C端。

进一步的，所述融合蛋白His-AGR2-DsRed的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

具体为：