[发明专利]一种松材线虫RNAi调控基因及其应用

说明书

本发明提供了一种松材线虫RNAi调控基因，该RNAi调控基因的全长序列如SEQ ID NO:1所示，该RNAi调控基因的cDNA全长序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供了所述的松材线虫RNAi调控基因在制备松材线虫防治菌剂中的应用。本发明筛选到一段高效的RNAi调控基因片段，将含有该基因片段的阳性真菌转化子饲喂松材线虫，获得明显的RNAi表型，松材线虫Bx‑etr‑1基因表达明显下调，松材线虫出现胚胎发育不正常，幼虫死亡率高，运动轨迹改变，运动速度变慢，种群数量明显下降的现象。

技术领域

本发明属于生物工程的技术领域，具体涉及一种松材线虫RNAi调控基 因及其应用。

背景技术

松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)在松树内取食危害，引起的松材 线虫病导致松树大量地成片死亡，而且，其发病速度快，防控难度大，至今 没有很有效的可持续的防控措施。

RNA interference(RNAi)主要是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)可 以引起与之对应的靶基因mRNA降低的现象。利用RNAi技术在植物寄生性 线虫的防控中已得到应用，即通过寄主植物介导RNAi控制农业上重要的根 结线虫和胞囊线虫的种群数量，已成为具有广泛应用前景的新的防控途径。 在松材线虫的研究中，真菌介导RNAi技术已建立。

因此，筛选高效的RNAi靶标是进一步开发松材线虫RNAi防控技术的 关键。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种松材线虫RNAi调控基因及 其应用。

具体的，本发明提供了一种松材线虫RNAi调控基因，该RNAi调控基 因的全长序列如SEQ ID NO:1所示。

需要进一步说明的，该RNAi调控基因的cDNA全长序列如SEQ ID NO:2 所示。

需要进一步说明的，该RNAi调控基因的编码氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

本发明还提供了一种重组表达质粒，其含有RNAi调控基因的cDNA片 段序列，cDNA片段的序列如SEQ ID NO:4所示。

需要进一步说明的，该重组表达质粒通过以下方法获得：在正向和反 向引物的5’端添加HindⅢ和XbaI的酶切位点，扩增上游片段；及在正 向和反向引物的5’端添加ApaI和SpeI的酶切位点，扩增下游片段；然后 使用HindⅢ、XbaI酶分别对质粒和上游扩增片段进行酶切，酶切后进行连 接；使用ApaI、SpeI酶对下游扩增片段和连接产物进行酶切，酶切后进 行连接。

需要进一步说明的，所述质粒为pDH-RH质粒。

本发明还提供了一种重组表达菌株，该重组表达菌株以农杆菌为宿主 细胞，将含有RNAi调控基因的cDNA片段序列的重组表达质粒转入到宿 主细胞得到。

本发明还提供所述的松材线虫RNAi调控基因在制备松材线虫防治菌 剂中的应用。需要进一步说明的，所述防治菌剂为转化有RNAi调控基因 的真菌。

需要进一步说明的，所述真菌为尖孢镰刀菌。

本发明通过农杆菌介导转化丝状真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)中，用阳性转化子饲喂松材线虫，获得明显的RNAi表型， 松材线虫Bx-etr-1基因表达明显下调，线虫出现胚胎发育不正常，幼虫死 亡率高，运动轨迹改变，运动速度变慢，种群数量明显下降的现象。因此， 可将本发明得到的松材线虫RNAi调控基因应用于松材线虫的防控中。

本发明的有益效果为：