[发明专利]一种荧光SSR引物组合及其在构建白蜡新品种分子指纹图谱中的应用

说明书

本发明公开了一种荧光SSR引物组合及其在构建20个白蜡新品种分子指纹图谱中的应用。其中荧光SSR引物组合由F202/R202和F208/R208的SSR引物对组成，在每对引物的上游引物的5′端加有FAM荧光标记，正向引物为与携带荧光标记的TP‑M13引物组成；该引物组合是利用构建白蜡新品种的特异指纹图谱或白蜡新品种分子身份证筛选获得，可以将20个白蜡品种完全区分开，克服了以往形态、生理鉴定的技术缺陷。同时本发明也为DNA指纹图谱在白蜡上的进一步应用研究以及评价白蜡种质资源和解决其品种产权纠纷提供科学、有效的参考依据。

技术领域

本发明涉及DNA指纹图谱技术领域，具体而言，涉及一种荧光SSR引物组合及其在构建20个白蜡新品种分子指纹图谱中的应用。

背景技术

白蜡属(Fraxinus)隶属木犀科(Oleceae)，木樨亚科。白蜡属植物全世界约70余种，我国有30多种，种质资源非常丰富，无论实生苗还是栽培种，均具有丰富的遗传多样性，这可能与其异化授粉的生物学特性有关，对其种质资源进行鉴别评价是育种研究工作的重要环节之一，但其种或品种的植物学分类存在争议。传统的白蜡分类鉴别主要依靠翅果、花、芽、叶及花粉粒等形态学标记，以翅果和花性状的差异最为明显，其次是芽、叶缘锯齿和果实缺刻被作为分类的依据。虽然形态标记研究简单直观且较经济，但有些不同种或品种间的形态特征极为相似，在种间交互难以区分，造成了白蜡属植物分类混淆问题，常出现同种多名称以及同名多品种的现象，导致白蜡命名上存在一些争议。在种质资源的鉴别中，仅依靠其形态性状，通常不能准确的反映不同品种的差别，因为形态性状极易受到环境的影响而发生变化，这给种或品种鉴别带来困难。

近年来，随着育种方法的不断进步，新的白蜡品种也不断涌现，这些白蜡种质资源有许多优异品种未能被合理利用，如何鉴别白蜡种的真伪、品种成为一个函待解决的问题。因此，将这些白蜡种质资源进行有效分类和鉴定，对白蜡种质资源的研究，品种创新尤为重要。

DNA指纹图谱技术对白蜡品种精准鉴定提供了一种有效的技术手段。简单重复序列(Simple Sequence repeat，SSR)分子标记具有分析方法简便、快速、共显性遗传、信息含量高、重复性好等优点，使其成为构建白蜡品种分子身份证的较理想的分子标记技术，并且已成功应用于玉米、水稻、小麦、番茄、柑橘、马铃薯等主要农作物中。以此方法构建品种的分子指纹图谱、鉴别品种的真伪和纯度，对种子产业化和品种的知识产权保护有重大意义。但这种方法存在成本高、耗时、且通过好多对引物结合检测位点才能鉴别。基于此，开发一种SSR引物组合并将其在构建20个白蜡新品种分子指纹图谱中的应用，为DNA指纹图谱在白蜡上的进一步应用，快速实现对白蜡新品种的区别与鉴定，克服以往形态、生理鉴定的技术缺陷，具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是供用一种荧光SSR引物组合及其在构建20个白蜡新品种分子指纹图谱中的应用。

本发明所述的荧光SSR引物组合，其特征在于：该荧光SSR引物组合由命名为F202和R202的SSR引物对和命名为F208和R208的SSR引物对组成，其中在每对引物的上游引物的5′端加有FAM(6-carboxy-fluorescein)荧光标记，正向引物为与携带荧光标记的TP-M13引物组成；所述F202和R202引物对中F202的核苷酸序列是如SEQ ID No.1所示的正向引物序列，R202的核苷酸序列是如SEQ ID No.2所示的正向引物序列，所述F208和R208引物对中F208的核苷酸序列是如SEQ ID No.3所示的正向引物序列，R208的核苷酸序列是如SEQ IDNo.4所示的正向引物序列。其详细信息见表1。

表1：荧光SSR引物组合及其扩增信息