[发明专利]检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析试纸条及应用

权利要求书

1.一种检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析试纸条，该检测试纸条由底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成，试纸两端设有保护膜；所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫依次粘贴于底板上；其中胶体金垫为吸附有胶体金标记的捕获抗体，包被膜上含有用检测抗体预包被检测线T线，用羊抗或兔抗小鼠IgG溶液预包被的质控线C线，两条线竖直平行排列；所述底板为PVC条或其它不吸水的硬质材料；所述样品垫和胶体金垫由玻璃纤维棉制成；所述吸水垫由吸水滤纸制成；所述包被膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为不透明的胶膜；其特征在于，所述捕获抗体由保藏编号为CCTCC NO:C2018217的杂交瘤细胞株skTnI-3A8分泌得到，所述检测抗体由保藏编号为CCTCC NO:C2018218的杂交瘤细胞株skTnI-3D3分泌得到；两株细胞株于2018年12月20日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏。

2.制备如权利要求1所述检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析试纸条的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备胶体金标记的捕获抗体：

将待标记的捕获抗体skTnI-3A8溶液10000r/min离心30min；取胶体金溶液10mL，用0.1mol/L K₂CO₃溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2；取等量捕获抗体溶液，磁力搅拌下与胶体金溶液混合，室温孵育15min，10000r/min离心30min，弃上清，将所得沉淀用每升含10gBSA、0.5g叠氮钠、浓度为0.02mol/L的Na₂B₄O₇溶液稀释，即获得胶体金标记的捕获抗体，4℃保存备用；

(2)胶体金垫制备：按规格裁取玻璃纤维棉，将胶体金标记的捕获抗体用喷金仪均匀喷洒于玻璃纤维棉上，37℃干燥1h，密封，4℃保存备用；

(3)检测线和质控线的制备：将检测抗体skTnI-3D3放于喷金仪贮存池A，羊抗小鼠IgG溶液放于贮存池B，开机分别点射于膜中央，形成间距0.5cm的直线式隐形检测线和隐形质控线，自然干燥，密封，4℃保存备用；

(4)试纸条组装：将样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫按顺序依次粘贴于底板上，并在试纸条两端的表面粘贴保护膜，在切槽机上切割成试纸条。

3.如权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条在用于检测生鲜肉及其制品中牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)样品前处理

生鲜肉类去除脂肪和结缔组织，加工肉类食品去掉肠衣，称取1g加入0.15M的NaCL溶液2ml，匀浆后用沸水加热20min，2000g离心30min；去除沉淀，上清用Whatman 1号滤纸过滤，收集滤液用于检测；

(2)用胶体金免疫层析试纸条检测

从包装中取出所述检测牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析试纸条，将样品端插入待测样品液中，插入深度不超过标记线，约10-20秒钟取出检测试纸条，水平放置，3-5分钟观察判定检测结果，10分钟以后结果无效；

(3)结果判定

(a)阳性：如果包被膜上对应的质控区C位置显示一条棕红色线，检测区T位置显示棕红色线，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I；

(b)阴性：如果在包被膜上T位置不显色，在C位置显示有一条棕红色线，表示结果为阴性，说明在待测样品中不含牛或羊骨骼肌肌钙蛋白I；

(c)失效：当质控区C不显示出棕红色条带，则无论检测区T显示出棕红色条带与否该试纸均判为无效。