[发明专利]一种抗人DLL4和抗人VEGF双特异性抗体及其制备与应用

说明书

本发明属于抗体领域；一种双靶向VEGF和DLL4的双特异性抗体，其特征在于：所述的抗体包括四条链，依次为SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列，SEQ IDNO:2所示的氨基酸序列，SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列，SEQ IDNO:4所示的氨基酸序列；本发明首次构建了双靶向VEGF和DLL4双特异性抗体HB‑32，该抗体能分别与抗原VEGF和DLL4特异性结合，具有良好的抗肿瘤活性。

技术领域

本发明属于抗体领域，具体涉及一种抗人DLL4和抗人VEGF双特异性抗体HB-32及其制备与应用。

背景技术

DLL4与肿瘤

Dll4(Delta like 4)Dll4作为Notch信号通路中Notch受体的配体蛋白之一，是一种重要的血管生长发育调节因子，主要存在于胚胎和成年组织的血管内皮细胞，通过与邻近细胞上的相应受体(Notch1或Notch4)相互作用启动细胞内信号传递，从而调节血管生成和分支的过程。近年来许多试验结果表明，Dll4/Notch信号通路通过抑制血管分支的发生和促进血管功能完善来抑制血管的过度形成。当细胞表面的DLL4过表达时，内皮细胞的增殖、迁移和管腔的形成会减少。基因敲除内皮细胞中的Dll4，多种内皮细胞的功能受到了明显抑制。提示一个合适的Dll4表达水平对内皮细胞发挥其正常功能是必需的，过少或过多的表达都可能引起功能异常。研究发现，DLL4在多种恶性肿瘤中表达异常，如乳腺癌、膀胱癌、大肠癌、妇科肿瘤、肝癌、胰腺癌和骨肉瘤等，并与多种恶性肿瘤的浸润程度、转移程度和疾病的预后情况有着密切的关联。大量研究表明，阻断Dll4/Notch信号通路可促进无功能血管的大量生成从而抑制肿瘤的生长。目前，DLL4融合蛋白和抗DLL4单克隆抗体正在进行实验室研究或临床研究。OMP-21M18为DLL4抗体，阻止DLL4与Notch1、Notch4的结合。研究证实，抑制DLL4的单克隆抗体，单药或联合伊立替康均可减少乳腺癌干细胞比率，从而抑制肿瘤的形成。Regeneron公司研发的REGN421抗DLL4抗体通过阻断DLL4与Notch的相互作用，使肿瘤新生血管功能障碍，缺乏血流灌注和氧气的运输，从而抑制肿瘤的生长。

VEGF与肿瘤

血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)，主要功能是特异性地促进内皮细胞有丝分裂和介导血管形成并增加血管通透性。VEGF是由某些肿瘤细胞分泌的能直接促进血管内皮细胞分裂、增殖，并可诱导肿瘤血管形成的，目前已知专属性最高、活性最强的促血管生成因子。它参与肿瘤细胞的生长、分化、转移、增殖等过程，并与多种肿瘤包括食管癌、肺癌、宫颈癌等的发生、发展有密切的相关性。所以,阻断VEGF信号传导可以抑制肿瘤的生长和转移。但到目前为止,以VEGF为靶点的抗肿瘤药物仍然存在许多问题,但不能忽视的是,在某些癌症治疗中的作用是非常重要的。

DLL4/Notch通路与VEGF通路之间存在Crosstalk

研究显示，Dll4是VEGF的下游基因，它通过对VEGF的负反馈来限制其作用，减少血管的过度生长。人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外培养发现，阻断Dll4/Notch通路后，血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)受体表达上调，VEGFR-1受体下降；而通过Dll4来活化Notch通路后，VEGFR-2受体表达下降。VEGFR-2是血管内皮生长因子VEGF发挥作用的主要结合部位。因此，Dll4通过下调VEGFR-2和上调VEGFR-1来调控VEGF信号通路在血管生长中的作用。近年发现一些对VEGF抑制剂和Dll4抑制剂对于肿瘤的抑制作用比各自单独使用的效果更佳，通过特异性Dll4阻断促使肿瘤内缺氧和凋亡来抑制肿瘤发展。

双特异性抗体