[发明专利]绿色木霉发酵方法及其水分散粒剂

说明书

本发明提供绿色木霉发酵方法及其水分散粒剂，涉及微生物农药领域。绿色木霉发酵方法，包括如下步骤：将绿色木霉LTR‑2接种至发酵培养基，发酵前期控制温度为29‑31℃，发酵后期控制温度为24℃‑26℃、pH为5.0～5.5，得到富含厚垣孢子的绿色木霉LTR‑2发酵液。采用本发明方法，能够获得富含厚垣孢子的绿色木霉发酵液，显著提高产品的抗逆性，延长货架期；其水分散粒剂对番茄灰霉病、马铃薯晚疫病、烟草白粉病的防治效果明显优于对照药剂和农用制剂DZ‑1。

技术领域

本发明涉及微生物农药领域，更具体地说是涉及绿色木霉发酵方法及其水分散粒剂。

背景技术

木霉菌属于半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目，粘孢菌类，是一类普遍存在的真菌。

绿色木霉菌（Trichoderma viride）在自然界分布广泛，常腐生于木材、种子及植物残体上。绿色木霉菌能产生多种具有生物活性的酶系，如：纤维素酶、几丁质酶、木聚糖酶等。在植物病理生物防治中具有重要的作用。绿色木霉菌是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好。

大多数绿色木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，并能提高农作物的抗逆性，促进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤改良剂。由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对环境较为友好的绿色木霉菌受到了广泛的关注。

厚垣孢子（chlamydospore）又称厚壁孢子。它是由菌丝中间的个别细胞膨大，原生质浓缩和细胞壁变厚而形成的变态菌丝，既不是无性孢子，也不是有性孢子。厚垣孢子呈圆形、纺锤形或长方形，它是真菌度过不良环境的一种休眠细胞，寿命较长，菌丝体死亡后，上面厚垣孢子还活着，一旦环境条件好转，又能萌发成菌丝体。

分生孢子（conidiospore）是真菌中常见的一类无性孢子，是生于细胞外的孢子，所以称为外生孢子。分生孢子着生与已分化的分生孢子梗（conidiophore）或具有一定形状的小梗上，也有些真菌的分生孢子就着生在菌丝的顶端。

跟分生孢子相比，厚垣孢子存在抗逆性强、货架期长等优点，但是现有技术发酵培养绿色木霉LTR-2，仅能得到富含分生孢子的发酵液。

发明内容

本发明的目的是提供绿色木霉发酵方法，能够获得富含厚垣孢子的绿色木霉发酵液，显著提高产品的抗逆性，延长货架期。

本发明的再一目的是提供绿色木霉的水分散粒剂。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

绿色木霉发酵方法，包括如下步骤：将绿色木霉LTR-2接种至发酵培养基，发酵前期控制温度为29-31℃，发酵后期控制温度为24℃-26℃、pH为5.0～5.5；发酵结束后，得到富含厚垣孢子的绿色木霉LTR-2发酵液；所述发酵培养基含有如下成分：玉米粉18～22g/L、葡萄糖8～12g/L、磷酸二氢钾7～8g/L、碳酸钙4～6g/L、硝酸钠0.8～1.2g/L、硫酸铵1～2g/L、氯化钠0.8～1.2g/L、七水硫酸镁0.4～0.6g/L、七水硫酸亚铁0.4～0.6g/L、硫酸锰0.15～0.25g/L、硫酸锌0.15～0.25g/L，pH为6.0～7.0。

在本发明中，所述发酵前期是自发酵开始至发酵后65-72h，发酵后期是发酵后72h-发酵后178h。

在本发明中，将绿色木霉LTR-2种子液接种至发酵培养基。

在本发明中，所述发酵液是将绿色木霉LTR-2接种至液体种子培养基，在25-30℃条件下培养2~3d，得到绿色木霉LTR-2种子液；所述液体种子培养基是将马铃薯切块，加蒸馏水，煮沸后取滤液，加入葡萄糖，搅拌后所得。

本发明还提供采用上述方法得到的发酵液。