[发明专利]一种两栖类动物细胞解离试剂盒

说明书

本发明公开了一种两栖类动物细胞解离试剂盒。本发明的试剂盒包括以下试剂：试剂C含有胶原酶Ⅰ和分散酶Ⅱ，浓度依次为43000‑53000U/100ml、90‑110units/100ml；试剂D含有胶原酶Ⅰ，浓度为55000‑65000U/100ml。试剂E含有胰蛋白酶和金属离子螯合剂，浓度依次为120000‑180000USPU/100ml、0.03‑0.07g/100ml。试剂F含有胶原酶Ⅱ，浓度为50000‑55000U/100ml。本发明还保护一种解离两栖动物组织获得单细胞的方法：皮肤组织，剪碎，用试剂C处理；肌肉组织，剪碎，先加入试剂D处理，再加入试剂E处理；骨骼组织，切碎，用试剂F处理。本发明可以应用到各种两栖动物肢体皮肤、肌肉，骨骼组织的单细胞研究。

技术领域

本发明涉及一种两栖类动物细胞解离试剂盒。

背景技术

以蝾螈为代表的诸多两栖动物具有强大的再生能力，但是由于其自身特性如细胞渗透压、生活适应温度与哺乳动物有较大差异，其细胞分离和培养方法丞待突破。

现在以两栖类动物为实验对象的实验室多数以组织整体为研究对象，缺少对细胞异质性的探索，在一些科学问题上停滞不前。且对哺乳动物而言最常见的将组织或培养的细胞解离成单细胞的方法就是酶解的方法，而胰酶因为价格便宜、作用强，成为现在实验室最常用酶。

现有技术中存在的问题如下：

(1)若以哺乳动物各类型的细胞解离方法，则存在解离温度不适宜，无法控制酶的活性，细胞难以维持和体内相同的状态，若以此为研究对象并不能确保实验结果的真实性；

(2)解离效率不高，为了达到研究要求，需要解离更多组织，增加实验成本；

(3)胰酶本身作用比较强，容易造成细胞膜损伤，引起细胞凋亡，难以保证细胞活率，不利于后续研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种两栖类动物细胞解离试剂盒。

本发明要求保护一种用于解离两栖类动物组织获得细胞的试剂盒，所述试剂盒包括以下试剂：试剂C、试剂D、试剂E和试剂F。

所述试剂C含有胶原酶Ⅰ和分散酶Ⅱ，胶原酶Ⅰ的浓度为43000-53000U/100ml,分散酶Ⅱ的浓度为90-110units/100ml。

所述试剂D含有胶原酶Ⅰ，胶原酶Ⅰ的浓度为55000-65000U/100ml。

所述试剂E含有胰蛋白酶和金属离子螯合剂，胰蛋白酶的浓度为120000-180000USP U/100ml，金属离子螯合剂的浓度为0.03-0.07g/100ml。

试剂F含有胶原酶Ⅱ，胶原酶Ⅱ的浓度为50000-55000U/100ml。

所述试剂C含有胶原酶Ⅰ和分散酶Ⅱ，胶原酶Ⅰ的浓度为48000U/100ml,分散酶Ⅱ的浓度为100units/100ml。

所述试剂D含有胶原酶Ⅰ，胶原酶Ⅰ的浓度为60000U/100ml。

所述试剂E含有胰蛋白酶和金属离子螯合剂，胰蛋白酶的浓度为150000USP U/100ml，金属离子螯合剂的浓度为0.03-0.07g/100ml。

试剂F含有胶原酶Ⅱ，胶原酶Ⅱ的浓度为52200U/100ml。

所述试剂C含有胶原酶Ⅰ和分散酶Ⅱ，胶原酶Ⅰ的浓度为0.1-0.3g/100ml,分散酶Ⅱ的浓度为0.1-0.3g/100ml。

所述试剂D含有胶原酶Ⅰ，胶原酶Ⅰ的浓度为0.2-0.3g/100ml。

所述试剂E含有胰蛋白酶和金属离子螯合剂，胰蛋白酶的浓度为0.4-0.6g/100ml，金属离子螯合剂的浓度为0.03-0.07g/100ml。