[发明专利]一种包虫重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种包虫重组蛋白及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域，包括包虫抗原和包虫单链抗体；所述包虫抗原为含有主要抗原决定簇的AgB8/2抗原；所述包虫单链抗体为scFv，包括以下步骤:(1)查找包虫中含有主要抗原决定簇的AgB8/2抗原；(2)优化包虫AgB8/2抗原基因的密码子，合成核酸序列并进行表达；(3)构建针对包虫AgB8/1抗原的单链抗体，调取单链抗体scFv的基因；(4)重组优化的包虫AgB8/2抗原基因和针对包虫AgB8/1抗原的单链抗体scFv的基因，并进行表达；(5)纯化及复性包虫重组蛋白。本发明在开发单克隆抗体的基础上又进行重组抗体技术开发单链抗体，易于在细胞中表达，可以在真核或者原核细胞中表达，可大量生产，成本较低。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种包虫重组蛋白及其 制备方法和应用。

背景技术

包虫病分为囊性包虫病和泡型包虫病,其中70％的泡型包虫病患 者在5年内死亡,10年内的死亡率高达92％。因其高感染率和高致死 率,包虫病又有“虫癌”之称。净水工程和犬类管理被视为切断虫卵 源头的关键。

包虫病是人感染棘球绦虫的幼虫(棘球蚴)所致的慢性寄生虫病。 本病的临床表现视包虫囊部位、大小和有无并发症而不同。长期以来, 包虫病被认为是一种人畜共患寄生虫病,称之为动物源性疾病。根据 近年来流行病学调查,称之地方性寄生虫病；在流行区带有职业性损 害的特点,被列为某些人群的职业病；从全球范围讲包虫病为少数民 族或宗教部落所特有的一种常见病和多发病。

体外诊断核心原料的开发是开发相应诊断试剂的前提，只有开发 出具有高活性、高性能的抗原抗体，体外诊断试剂产品才能成为现实。 因此，针对包虫抗体和抗原开发出能够用以生产诊断试剂的原料迫在 眉睫，从某种程度上说，原料的开发也必将成为降低包虫病蔓延的首 要解决问题。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种包虫重组蛋白及其制备方法和应 用。

本发明的技术方案:一种包虫重组蛋白，包括包虫抗原和包虫单 链抗体；

所述包虫抗原为含有主要抗原决定簇的AgB8/2抗原；

所述包虫单链抗体为scFv。

一种包虫重组蛋白的制备方法，包括以下步骤:

(1)查找包虫中含有主要抗原决定簇的AgB8/2抗原；

(2)优化包虫AgB8/2抗原基因的密码子，合成核酸序列并进行 表达；

(3)构建针对包虫AgB8/1抗原的单链抗体，调取单链抗体scFv 的基因；

(4)重组优化的包虫AgB8/2抗原基因和针对包虫AgB8/1抗原 的单链抗体scFv的基因，并进行表达；

(5)纯化及复性包虫重组蛋白。

本发明的表达系统为大肠杆菌表达系统，它具有周期短，费用低， 表达量大等特点。

为了使得重组蛋白更好地保持活性位点，本发明选择比较温和的 培养和诱导条件，其表达时的诱导温度为20℃、25℃、28℃、37℃， 进一步优选的诱导温度为25℃、37℃，更进一步优选的诱导温度为 25℃。诱导转速为250rpm，诱导的IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖 苷)浓度为0.1mM。这样使得重组蛋白有了更加缓慢的表达，有充分 的时间进行空间构象的形成。

本发明采用超声的方式破碎细菌。在破碎菌体的时候，为了避免 剧烈条件，将破碎条件定为200w，每次超声6s，间隔3s超声一次， 共180次。

本发明重组蛋白的纯化方式有离子交换层析，凝胶过滤层析和亲 和层析等方法，进一步优选为亲和层析。