[发明专利]一种快速检测兔瘟病毒的胶体金检测卡及其制备方法

说明书

本发明涉及一种快速检测兔瘟病毒的胶体金检测卡及其制备方法，具体步骤为：(1)配对的抗兔瘟病毒单克隆抗体的制备，包括免疫程序、细胞融合、杂交瘤筛选及克隆化、抗体制备及纯化；(2)快速检测兔瘟病毒的胶体金检测卡及其制备方法，包括胶体金单克隆抗体的制备、样品垫处理、喷膜、C,T线确定、被测样本的处理、性能测定。本发明可以快速、灵敏、准确的检测兔子的肝脏、肾脏部位的兔瘟病毒感染，克服了国内检测兔瘟病毒主要以红细胞凝集实验的方法，大大缩短了检测时间，为现场检测提供了方便。

技术领域

本发明涉及一种快速检测兔瘟病毒的胶体金检测卡及其制备方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

兔瘟，又被称作兔病毒性出血综合症，是对兔威胁最严重的一种病毒性传染病，其突出的特点是发病快、传播急速、从发病到死亡时间很短，死亡率很高。兔群一旦被感染，往往会全群覆没。这种疾病在青年兔以及成年兔中发病率最高，受季节影响很小，一般在春季和秋季最容易爆发。兔子养殖户，必须要严格做好兔瘟防治，否则一旦感染了此疾病，必然会带来非常重大的经济损失。兔瘟病毒(RHDV)传染将给予兔群以毁灭性打击，危害性极大。RHDV是养兔业和实验用兔必检病毒之一。随着我国养兔业的发展及实验动物标准化程度的普及和提高，RHDV诊断方法的建立和标准化不可或缺。

目前常用的RHDV检测方法是血凝抑制试验(HI)，HI试验需要人O型红血球，血清需经过吸附处理，过程较为繁琐；结果判定易受许多主、客观因素的影响，所以在实际应用中受到很多限制。而胶体金诊断方法具有特异性和敏感性强、快速准确、通量高等特点，是动物传染病检疫、免疫抗体水平监测和流行病学调查广泛采用的诊断技术。VP60是RHDV唯一结构蛋白，是病毒免疫保护性抗原，在RHDV诊断、新型疫苗的研制中具有十分重要的意义。

在现有兔瘟病毒的检测中，目前国内研究较少，发明专利申请 CN201510380893.1系发明人研制的一种兔瘟病毒抗体快速检测卡，具体步骤为：(1)抗兔瘟病毒VP60单克隆抗体的制备，包括免疫程序、细胞融合、杂交瘤筛选及克隆化、抗体制备及纯化；(2)兔瘟病毒抗体快速检测卡的制备，包括胶体金溶液的熬制、抗兔瘟病毒VP60单克隆抗体的标记、金标垫处理、样品垫处理、C,T线确定。本发明可以快速、灵敏、准确的检测兔瘟病毒抗体，克服了国内检测兔瘟抗体主要以红细胞血凝，酶联免疫检测的问题。但是该方法不能有效检测是病毒感染导致的血清阳性还是疫苗接种后产生的血清阳性。

基于现有兔瘟病毒的检测方法不丰富的问题，市场上需要有效的兔瘟病毒检测手段，以解决RHDV检测困难的技术问题。因此，开发更加灵敏、准确的兔瘟病毒的检测方法是亟需解决的技术问题。

发明内容

为解决以上技术问题，丰富兔瘟病毒的检测手段，本发明旨在提供了一种快速检测兔瘟病毒的胶体金检测卡及其制备方法和应用，本发明所述的快速检测兔瘟病毒的胶体金检测卡能够快速、灵敏、准确的检测兔瘟病毒，减少了检测时间和降低检测成本。

为解决以上技术问题，本发明的技术方案如下：

一种快速检测兔瘟病毒的胶体金检测卡，所述胶体金检测卡包括依次相连接的吸水垫7、基膜6、金标垫3和样品垫1，其特征在于，所述基膜上设置有C线和T线，所述C线上包被有羊抗鼠IgG的抗体，所述金标垫中含有胶体金标记的第一单克隆抗体，所述T线上包被有第二单克隆抗体；所述第一单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201582的杂交瘤细胞株分泌得到；所述第二单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C2018148的杂交瘤细胞株分泌得到。

本发明还请求保护分泌抗兔瘟病毒抗体的杂交瘤细胞株，第一分泌抗兔瘟病毒抗体的杂交瘤细胞株2F4于2015年6月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201582，保藏地址为中国武汉-武汉大学；第二分泌抗兔瘟病毒抗体的杂交瘤细胞株Vp60 9D4于2018年6月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2018148，保藏地址为中国武汉-武汉大学。