[发明专利]舞毒蛾BURS基因、其编码蛋白及其dsRNA在害虫防治中的应用

说明书

舞毒蛾BURS基因、其编码蛋白及其dsRNA在害虫防治中的应用，涉及分子生物学领域，尤其涉及舞毒蛾BURS基因、其编码蛋白及其应用。本发明是要解决现有舞毒蛾的化学防治存在抗药性和污染环境的问题。舞毒蛾BURS基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。其编码区CDS编码蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：3所示。舞毒蛾BURS基因dsRNA能够显著抑制BURS基因的表达，导致舞毒蛾雌性、雄性成虫翅表型均出现不能正常伸展现象，翅发育畸形。本发明用于舞毒蛾害虫防治领域。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及舞毒蛾BURS基因、其编码蛋白及其应用。

背景技术

舞毒蛾(Lymantria dispar Linnaeus)是一种的重要农林食叶害虫，具有分布范围较广、取食植物种类多、传播快、繁殖量大及周期性爆发等特点。据国内报道可舞毒蛾可危害约500多种植物，不仅给林业造成巨大的经济损失，而且使其生态效益受损。目前，尽管天敌性微生物、昆虫或是物理方法被应用于舞毒蛾害虫防治中，但是对于这种爆发性害虫防治效果不显著，化学农药凭借其高效、快速灭虫特性使其在舞毒蛾害虫的防治中依旧是占据着主要的防治手段。化学农药的长时间、高频率、使用量不断的增加，导致害虫出现抗药性、再增猖撅，以及农药残留等环境污染问题。化学农药使用后弊端的产生推动了新一代害虫防治研究的展开。分子生物学技术的快速发展，并使其被广泛应用于害虫的生理机制研究及防治，其中RNA干扰技术凭借其高效沉默、特异性强、操作简便、节省时间及实验规模较小，以及能够阻碍昆虫的正常生理机制运行的特点成为植物保护者通过沉默功能基因导致害虫正常发育受阻来达到害虫防治的重要手段。在通过RNAi进行害虫防治研究中，重要靶基因中有效基因片段是其成功的关键。

因此，为解决现有舞毒蛾的化学防治存在抗药性和污染环境的问题，采用生物学手段进行病虫害防治的研究至关重要。

发明内容

本发明是要解决现有舞毒蛾的化学防治存在抗药性和污染环境的问题，提供一种舞毒蛾BURS基因、其编码蛋白及其dsRNA在害虫防治中的应用。

本发明舞毒蛾BURS基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。其编码区CDS的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

本发明舞毒蛾BURS基因的编码区CDS编码蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ IDNO：3所示。

本发明舞毒蛾BURS基因的dsRNA序列如序列表中SEQ ID NO：4所示。

本发明以舞毒蛾BURS基因片段为模板，并设计特异dsRNA引物对，通过MEGAscriptRNAi试剂盒(Ambion)合成BURS基因dsRNA。

本发明舞毒蛾BURS基因的dsRNA在害虫防治中的应用。

具体方法为：将舞毒蛾BURS基因的dsRNA注射入饥饿12h后的舞毒蛾6龄幼虫体内。所述注射剂量为24μg。

本发明的有益效果：

鞣化激素是由BURS(α亚基)和PBURS(β亚基)构成的异源二聚体，在特定条件下与其受体结合，发挥调节昆虫蜕皮后新表皮的鞣化、翅的伸展和成熟、肌肉收缩、卵子边缘细胞的迁移等功能，主要在胸腹神经节中合成。在某种情况下BURS和PBURS分别具有独立的生物学活性，其同源二聚体的生物学功能未知。

本发明通过RNA干扰技术抑制鞣化激素α亚基BURS基因转录水平，导致舞毒蛾成虫翅的发育畸型来防治农林重要害虫舞毒蛾。

本发明公开了舞毒蛾BURS基因全长核酸序列以及应用于合成dsRNA的序列，根据本发明提供的基因全长及用于合成dsRNA的序列能够显著抑制BURS基因的表达，导致舞毒蛾雌性、雄性成虫翅表型均出现不能正常伸展现象，翅发育畸形间接影响舞毒蛾成虫的飞行能力、交配及产卵量，为舞毒蛾害虫防治提供新方法，且不会存在抗药性和污染环境的问题。