[发明专利]一种新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素的检测方法

权利要求书

1.一种新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素的检测方法，其特征在于，该检测方法针对新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素进行检测，具体用于分别或者同时对维生素B₁、维生素B₂、维生素B₃、维生素B₅、维生素B₆、维生素B₇和维生素B₉、维生素B₁₂和维生素B₁₆中一种或任意几种进行定性或者定量检测，该方法具体包括如下步骤：

（一）对新鲜烟叶进行预处理

（1）首先，将新鲜烟叶打碎，备用；

（2）其次，以0.5 mmol/L盐酸溶液作为提取液，每20mg粉碎烟叶样品中，加入提取液0.5~1.5mL，35~42℃进行避光萃取30~60min；

（3）最后，将上述混合体系离心，取上清液，过滤，取滤液进行测定；

（二）利用HPLC-MS/MS绘制标准曲线

（1）首先，利用超纯水配制维生素B₁、维生素B₂、维生素B₃、维生素B₅、维生素B₆、维生素B₇和维生素B₉、维生素B₁₂和维生素B₁₆母液以及其混合标准工作溶液；

（2）其次，进行液相色谱、质谱检测；

液相色谱检测分析时，具体操作参数为：

色谱柱：Waters公司ACOUTITY UPLC HSS T3柱，规格2.1×100mm，1.8μm；

色谱分析时：柱温40℃；进样量：1μL；

以流动相A/B相进行梯度洗脱：

流动相A，10mmol/L的甲酸铵水溶液，

流动相B，0. 1%甲酸-甲醇溶液；

流速：0.3 mL min^-1；

质谱分析时，质谱条件设置为：

离子源：电喷雾离子源；正离子扫描；多反应监测；

干燥气温度：290℃，干燥气流量：12 L min^-1；

雾化器压力：40 psi；鞘气温度：200℃，鞘气流量：11L min^-1；

正离子电离模式下毛细管电压：4 kV，负离子电离模式下喷雾电压：3.5 kV；

各B族维生素样品MRM模式下特征碎片离子如下：

（3）最后，分别配制用于正离子扫描模式的系列浓度的混合标准溶液，并进行测定，以目标组分定量离子的峰面积平均值Y对质量浓度X进行线性回归分析，最终得到线性方程；

（三）定性或定量测定

采用步骤（二）中相同测定方法对步骤（一）中样品进行测定，然后利用步骤（二）中所得线性曲线计算获得步骤（一）中样品中的维生素B族具体类型和含量。

2.如权利要求1所述新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素的检测方法，其特征在于，步骤（一）的步骤（1）中，将新鲜烟叶液氮速冻、干燥后粉碎100~300目。

3.如权利要求2所述新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素的检测方法，其特征在于，步骤（一）的步骤（2）中，每20mg粉碎烟叶样品中，加入提取液1mL，40℃避光、超声辅助萃取40min。

4.如权利要求3所述新鲜烟叶中内源水溶性B族维生素的检测方法，其特征在于，步骤（一）的步骤（3）中，对上清液利用0.45μm滤膜过滤。