[发明专利]检测CASP7基因rs12415607位点多态性的人工模拟核酸分子信标与试剂盒

说明书

本发明公开了一种CASP7基因rs12415607位点多态性的分型检测方法与试剂盒。本发明采用CASP7基因特异性的引物SEQ1和SEQ2扩增CASP7基因片段，同时在CASP7基因特异性的引物界定的扩增区域内设计CASP7基因特异性人工模拟核酸分子信标SEQ3‑FAM和SEQ4‑VIC。本发明提供的基于基因特异性PCR结合人工模拟核酸分子信标判断CASP7基因rs12415607位点多态性的方法不仅准确率高，而且还具有检测速度快、操作简单、结果判读客观、闭管反应污染少等优点，非常适合于在临床中大规模开展。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及CASP7基因rs12415607位点多态性的分型检测方法与试剂盒。

背景技术

肺癌是全球与癌症相关的主要死亡因素之一，虽然吸烟是导致肺癌的重要原因，但实际上只有20%的吸烟者最终会患上肺癌。这表明在肺癌的发病过程中，遗传因素也起着至关重要的作用。在肺癌的病因学研究中，已经确定了一些与之相关的易感基因、低外显率基因。除此之外的其他途径也有可能与肺癌的发病机制有关，其中凋亡基因在人类癌症易感性中的作用越来越受到普遍重视。

细胞凋亡在发育和细胞及组织稳态中起着重要作用。细胞凋亡途径的缺陷可能造成体细胞突变累积，从而增加癌症的风险。细胞凋亡过程中的细胞破坏是通过半胱天冬酶（CASP）实现的，CASP是高度保守的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族。基于它们的促凋亡功能，半胱天冬酶可被分离成启动子CASP，其将死亡信号与细胞死亡程序联系起来；执行CASP则协调的蛋白水解程序，导致关键细胞结构的破坏。在人类中，有两个执行CASP，CASP3和CASP7。CASP7中的单核苷酸多态性位点rs12415607（A/C），其AA基因型个体患肺癌的风险显著增加。通过对该位点的检测可以从整体上分析患肺癌的风险，从而对该疾病的预防提供参考。

目前，基因多态性检测的方法主要有PCR-Sanger测序法、芯片杂交法、高分辨率溶解曲线法等。这些方法虽然都可以在一定程度上检测基因多态性，但都有不可忽视的局限性。Sanger测序法步骤较多，需要PCR后处理，不仅操作繁琐，还易产生污染，并不能满足临床的需求。芯片杂交法操作繁琐，其检测还依赖于昂贵的设备仪器，导致成本较高。高分辨率溶解曲线法对仪器要求高，需要具有安装高分辨率软件、温度比较敏感的机器才能使用，临床推广存在困难。基于Taqman水解探针的荧光定量PCR，利用Taq酶的外切酶活性，切断探针产生荧光信号，由于Taqman探针荧光基团与淬灭基团并不紧密靠近，导致荧光淬灭不彻底，存在背景荧光信号。此外，Taqman探针对于单碱基错配识别能力较差，极易生成非特异荧光信号，干扰结果判读，进而影响检测的准确性。因此，临床上迫切需要一种简便易行、灵敏度高、准确可靠的检测基因多态性的方法。