[发明专利]HLA-B高分辨基因测序试剂盒

说明书

本发明公开了HLA‑B高分辨基因测序试剂盒，包括1对扩增引物，如SEQ ID NO.1、2所示，以及用于测序的5条测序引物，如SEQ ID NO.3～7所示。本发明还公开了HLA‑B基因分型的检测方法：利用SEQ ID NO.1、2所示的扩增引物进行PCR扩增，然后利用SEQ ID NO.3～7所示的测序引物进行测序，从而确定HLA基因的型别。本发明的试剂盒和方法，对2、3、4外显子进行测序，必要时还可对1、5外显子进行补充测序，分型结果组合少。可对B位点全长进行准确分型，可兼并一代及二代测序平台，HLA基因测序试剂盒中主要试剂可自行配置并优化，大大降低的试剂成本同时，提高了分型的准确率。

技术领域

本发明涉及一种HLA-B高分辨基因测序试剂盒，属于基因检测技术领域。

背景技术

人类主要组织相容性复合体(MHC)又称人类白细胞抗原(HLA)，是人类最复杂的遗传多态性系统。HLA基因位于人第6号染色体短臂6p21.31上，其编码的HLA-I类分子和HLA-II类分子在调控机体免疫应答、决定疾病易感性中发挥重要作用。

根据基因位点的产物和它们的功能，HLA可以分为：Ⅰ类抗原：HLA-A、B、C位点的产物，Ⅱ类抗原：HLA-DR、DQ、DP位点的产物，三类抗原：C4A、C4B、C2、Bf等补体成分组成。多态性是HLA的重要特征，截止2018年5月，国际免疫遗传学数据库(IMGT,http://www.ebi.ac.uk/ipd/imgt/hla/)公布了18181种HLA等位基因，其中Ⅰ类和Ⅱ类抗原和移植密切相关。

准确的HLA分型技术和分型数据已被广泛应用于器官和造血干细胞移植中寻找HLA相匹配的供者、HLA与疾病相关性的研究、亲子关系鉴定、个体识别以及以肽为基础的病毒和癌症疫苗的研发等应用领域。供受者间HLA等位基因的配合程度与移植效果密切相关，精确的HLA分型有助于提高移植后的存活率。

目前国际标准的HLA分型技术有PCR-SSP(序列特异引物聚合酶链式反应)，PCR-SSO(聚合酶链式反应寡核苷酸探针杂交)和PCR-SBT(基于序列的分型方法)。SSO法的原理是设计HLA基因型别特异的寡核苷酸序列作为探针，对PCR产物进行标记，以PCR产物与探针进行杂交，通过检测信号判断基因型别。SSP法需要设计出一整套基因特异性引物，通过PCR技术获得特异性产物，通过电泳分析决定基因型别。PCR-SBT是对DNA进行直接测序分析基因分型方法，是WHO推荐的高分辨水平HLA基因分型的实验方法，可直接获得DNA序列，鉴定所有存在的多态性，为最直接、最直观的方法。

直接测序分型(PCR-SBT)，是目前HLA高分辨率分型的“金标准”，SBT法分为一代测序和二代测序(Next Generation sequencing，NGS)。PCR-SBT具有结果准确和自动化程度高等优点，能进行序列识别和分型，在发现新的等位基因方面更是具有独特的优势。一代测序方法自1977年诞生至今已经是一个很成熟的方法，二代测序相对于一代测序进行HLA分型具有高通量、易自动化、减少模棱两可结果等特点。目前一代测序HLA-B基因常规测序有2、3、4外显子。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种HLA-B高分辨基因测序试剂盒，其可同时应用在一代测序和二代测序Illumina平台上，在控制成本，提高分型分辨率等方面都有优势。

本发明是通过以下技术方案实现的：

HLA-B高分辨基因测序试剂盒，包括用于扩增HLA-B基因全长的1对扩增引物(能够扩增HLA-B的1，2，3，4，5，6，7外显子，包含全外显子，扩增长度2.8K)，以及用于测序HLA-B基因2、3、4外显子的5条测序引物，其中，1对扩增引物的核苷酸序列如下所示：

ampB-F：5'-TGTCGGGACCTTCTTCA-3'；如SEQ ID NO.1所示；