[发明专利]一种犬瘟热病毒抗体荧光检测试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种犬瘟热病毒抗体荧光检测试纸条及其制备方法和应用。本发明所提供的试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫a、结合物释放垫b、硝酸纤维素膜、吸水垫及底板，所述结合物释放垫a上喷涂有鸡抗犬抗抗体‑生物素偶联物，所述结合物释放垫b上喷涂有链霉亲和素‑荧光微球标记物，所述硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，所述检测线上包被有犬瘟热病毒N表达蛋白，所述质控线上包被有羊抗鸡抗抗体。本发明的试纸条具有灵敏度高、特异性强、操作简单、经济实用等优点，可实现犬瘟热病毒抗体现场快速定量检测。

技术领域

本发明涉及犬瘟热病毒抗体的检测，具体涉及一种犬瘟热病毒抗体荧光检测试纸条及其制备方法和应用。

技术背景

犬瘟热(Canine Distemper，CD)是由犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus，CDV)感染引起的一种急性、高度接触性传染病，是对养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护危害最大的疫病之一。CDV属于副粘病毒科麻疹病毒属，是负链单股不分节的RNA病毒。CDV主要由核衣壳蛋白N、磷蛋白P、基质膜蛋白M、融合蛋白F、附着或血凝蛋白H、大蛋白L等6种蛋白组成，其中核衣壳蛋白N、融合蛋白F以及血凝蛋白H是犬免疫系统的主要目的抗原，是产生中和抗体的重要抗原。核衣壳蛋白N是保守性较强的免疫原性蛋白，除含B细胞表位，还含有T细胞表位，在犬瘟热感染的早期免疫应答中起主要作用，能引起强烈的抗体反应。

犬瘟热病毒病主要是通过疫苗预防，而疫苗免疫动物与感染动物体内都会产生结构蛋白抗体，因此检测结构蛋白抗体的诊断方法能确定动物对病毒株的抵抗力。同时日常监测疫苗产生抗体是对群体的日常监测选择疫苗、评估免疫程序合理性、掌握健康状态的重要手段，同时也可从侧面反映管理是否合理，也是适时注射疫苗的主要依据。

目前已建立的用于检测CDV抗体的血清学方法主要有血凝抑制试验、中和试验、ELISA法及免疫胶体金法等。血凝抑制试验需要新鲜且敏感性高的红细胞，检测时间需要2～3h；中和试验操作繁琐，需要较高的试验条件和操作水平，整个试验需1～2周的时间才能出结果；ELISA方法操作要求高，需要酶标仪测定结果，且不适合做单个样本的检测；免疫胶体金法虽然检测方便，不需专业技术人员和工作环境，但其检测的灵敏度低，且只能定性，检测范围窄。这些都限制了它们在犬瘟热病毒抗体临床检测中的应用，因此，本发明专利的目的就是克服以上几种方法的缺点，建立一种操作简便、灵敏、特异、快速的犬瘟热病毒抗体定量检测方法，应用于犬瘟热病毒免疫效果的监测，从而限制犬瘟热病毒的流行。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种犬瘟热病毒抗体荧光检测试纸条。

本发明所提供的犬瘟热病毒抗体荧光检测试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫a、结合物释放垫b、硝酸纤维素膜、吸水垫及底板；所述结合物释放垫a上喷涂有鸡抗犬抗抗体-生物素偶联物；所述结合物释放垫b上喷涂有链霉亲和素-荧光微球标记物；所述硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，所述检测线上包被有犬瘟热病毒N表达蛋白，所述质控线上包被有羊抗鸡抗抗体。

所述结合物释放垫a上采用的鸡抗犬抗抗体为鸡抗犬IgG的IgY，所述硝酸纤维素膜上质控线采用的羊抗鸡抗抗体为羊抗鸡IgY的IgG。

所述样品吸收垫、结合物释放垫a、结合物释放垫b、硝酸纤维素膜、吸水垫顺次固定在所述底板上。

本发明的另一个目的是提供一种上述犬瘟热病毒抗体荧光检测试纸条的制备方法，其包括步骤：

1)制备具有包被有犬瘟热病毒N表达蛋白的检测线和包被有羊抗鸡抗抗体的质控线的硝酸纤维素膜；

2)制备喷涂有鸡抗犬抗抗体-生物素偶联物的结合物释放垫a和喷涂有链霉亲和素-荧光微球标记物的结合物释放垫b；

3)将样品吸收垫、结合物释放垫a、结合物释放垫b、硝酸纤维素膜、吸水垫顺次固定在底板上。

具体地说，步骤包括：