[发明专利]一种抗泛种特异性疟原虫乳酸脱氢酶的抗体

说明书

本发明涉及一种新颖的包含泛种特异性疟原虫乳酸脱氢酶抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与泛种特异性抗原疟原虫乳酸脱氢酶蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于疟原虫乳酸脱氢酶蛋白的检测领域。

技术领域

本发明涉及免疫技术领域，具体而言，涉及一种抗泛种特异性疟原虫乳酸脱氢酶的抗体。

背景技术

疟疾(Malaria)是经按蚊叮咬或输入带疟原虫者的血液而感染疟原虫所引起的一种虫媒传染病。寄生于人体的疟原虫主要有四种：间日疟原虫(Plasmodium vivax,pv)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum,pf)、三日疟原虫(Plasmodium malariae,pm)、卵形疟原虫(Plasmodium ovale,po)。恶性疟原虫是常见的感染性疟原虫(75％)，是危害最大的病原体，它感染力强，增殖迅速，症状严重，初次感染者致死率高，由其引起的死亡占感染者死亡总数的95％以上，主要存在于非洲、南美和亚洲的热带地区；间日疟原虫是第二常见的疟原虫(20％)，也是非洲以外地区最常见的种类。WHO建议所有疟疾疑似患者应该即时进行疟疾的检测，疾病的快速、准确诊断对于抗疟药的正确使用，避免耐药株的产生及控制病情恶化、降低死亡率至关重要。

疟疾诊断是疟疾防治工作的重点。从检测技术原理上进行归类，目前检测疟原虫的方法可以分为四类。一是显微镜直接检测疟原虫，包括厚血膜和薄血膜，这也是目前临床上疟疾诊断的金标准。但费时，费力，需要熟练的技术人员和一定的实验条件。二是疟原虫核酸检测，检测靶标为疟原虫18S核糖体RNA等特异性核苷酸片段，常用的方法为荧光PCR方法和环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification LAMP)技术。该类方法虽然灵敏度和特异性高，但需要更复杂的仪器设备和技术条件作为支持，不适合作为疟疾流行区常规的检测手段,难以在基层推广应用。三是检测疟原虫色素，通常采用流式细胞检测技术或质谱方法。该方法需要专业的检测仪器，一般用于实验室研究，不适用现场检测。四是抗原抗体的免疫反应检测疟原虫，方法学上有免疫层析快速诊断试剂(RDT)和酶联免疫吸附(ELISA)，检测的靶抗原大多为PLDH、HRP-Ⅱ等诊断抗原。以抗原为检测目标的RDT应用在恶性疟原虫流行的落后地区具有重要意义，因其操作简便、快速、结果直观，无需复杂设备、敏感性和特异性高等优点，是WHO推荐用于现场诊断的方法。

目前，RDT方法常用的检测疟疾抗原主要为恶性疟原虫特有的富组氨酸蛋白-Ⅱ(Histidine-rich proteinⅡ,HRP-Ⅱ)和疟原虫乳酸脱氢酶(Plasmodium Lactatedehydiogenase，PLDH)。HRP-Ⅱ是一种恶性症原虫虫体特异性抗原，是恶性疟疾检测中最常用的靶抗原。疟原虫乳酸脱氢酶(Plasmodium Lactate dehydiogenase，PLDH)是保证疟原虫糖酵解正常进行的重要酶，与人红细胞和其他许多微物质的乳酸脱氢酶相比具有显著不同的物理、生化特性，是疟原虫生命活动过程中必需表达的蛋白，且有较高的丰度，因此成为疟原虫检测的重要靶点。由于PLDH仅由活的疟原虫产生，因而使用PLDH为检测抗原的方法还可以鉴别病人体内虫体的死活，由此可评价监测治疗效果及复燃的情况。另外，四种疟原虫产生的PLDH有不同的异构体，具有种、属特异性的抗原，主要可分为两大类：一是具有种特异性的LDH，包括pf LDH、pv LDH、pm LDH、po LDH，以此为靶蛋白生产的单抗只识别特异性种类疟原虫的LDH；二是泛种特异性抗原疟原虫乳酸脱氢酶(Pan-PLDH)，以此为靶蛋白生产的单抗可以识别四种疟原虫的LDH。