[发明专利]一种高纯度隐地蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度隐地蛋白的制备方法，步骤包括：

S1、将隐地蛋白的编码基因与TEV蛋白酶、T4噬菌体Hoc蛋白基因片段依次连接，制备Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白编码基因，所述隐地蛋白的编码区在TEV-Hoc融合蛋白基因的上游；

S2、将所述Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白的编码基因转入质粒中；

S3、将步骤S2所得质粒转入大肠杆菌宿主中；

S4、使用Hoc蛋白缺失的Hoc-T4噬菌体感染步骤S3所得的大肠杆菌宿主，培养宿主表达展示所述Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白的T4噬菌体；

S5、分离展示有所述Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白的T4噬菌体；

S6、从步骤S5所得T4噬菌体中分离所述Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白，TEV蛋白酶切、离心得上清液即为隐地蛋白溶液。

2.如权利要求1所述的高纯度隐地蛋白的制备方法，其特征在于：步骤S1中，所述Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白的编码DNA序列的上游引入Soc启动子序列，下游引入Hoc终止子序列。

3.如权利要求1所述的高纯度隐地蛋白的制备方法，其特征在于：步骤S3中，所述质粒转入大肠杆菌宿主中的方法为化学转化法。

4.如权利要求1所述的高纯度隐地蛋白的制备方法，其特征在于：步骤S4中，所述感染步骤包括：以MOI＝1的噬菌体浓度侵染培养的大肠杆菌细胞。

5.如权利要求1所述的高纯度隐地蛋白的制备方法，其特征在于：步骤S5中，所述分离展示步骤包括：

S51、将步骤S4所得培养液预冷后以42000-44000g离心力低温离心25-35min，弃上清；

S52、以PI-Mg缓冲液充分重悬沉淀，并加入DNase I至终浓度为10μg/ml以及氯仿，在36-38℃以180-220rpm转速培养25-35min；所述PI-Mg缓冲液组份包括：3.6-3.8g/LNa₂HPO₄、3.8-4.2g/L NaCl、2.8-3.2g/L KH₂PO₄、0.9-1.1mM MgSO₄；

S53、以4000-6000g离心力去除细胞残骸，所得上清即为展示有Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白的T4噬菌体颗粒悬浮液。

6.如权利要求5所述的高纯度隐地蛋白的制备方法，其特征在于：步骤S6中，分离所述Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白的步骤包括：将展示有Cryptogein-TEV-Hoc融合重组蛋白的T4噬菌体颗粒悬浮液使用42000-44000g离心力低温离心25-35min，去除上清，沉淀以TEV酶切缓冲液重悬。

7.如权利要求6所述的高纯度隐地蛋白的制备方法，其特征在于：步骤S6中，所述TEV蛋白酶切获取隐地蛋白溶液的步骤包括：以1000U的酶量30℃温育6h进行酶切处理，再使用42000-44000g离心力低温离心25-30min，上清即为隐地蛋白溶液。

8.一种农用抗菌抑菌剂，其特征在于：将权利要求1-7任一项权利要求所述制备方法制备得到的隐地蛋白溶液，直接作为农用抗菌抑菌剂。

9.如权利要求8所述的农用抗菌抑菌剂，其特征在于：所述隐地蛋白溶液直接喷施在农作物植株上，所述农作物为葡萄。