[发明专利]一种针对冷冻致死且脑未损伤的鳞翅目昆虫蛹脑解剖方法

说明书

本发明公开一种针对冷冻致死且脑未损伤的鳞翅目昆虫蛹脑解剖方法，包括以下步骤：切下蛹的头壳后，用冷凉的生理液冲洗头壳内血浆，露出脑后用固定液固定蛹头壳内脑，夹断附着头壳上的膜状物，然后把已成型的脑剖出，得到完整的脑组织。相对于现有技术，本发明能够得到完整的鳞翅目昆虫蛹的脑，并完整地保持了脑内超微结构的原始状态，避免结构损伤，利于下一步实验得到良好的结果。

技术领域

本发明属于昆虫解剖学领域，具体涉及一种针对冷冻致死且脑未损伤的鳞翅目昆虫蛹脑解剖方法。

背景技术

鳞翅目昆虫，包括蝶类和蛾类，如棉铃虫、菜粉蝶等，其幼虫大量取食植物茎叶和花果，是农业林业上的重要害虫，常给农业林业造成灾难性损失。

当前，对鳞翅目害虫的防治主要采用化学防治、物理防治、天敌防治等多种方法，但每种方法均有其局限性。昆虫中枢神经系统在调节昆虫行为、调控生长发育等方面起着重要的作用。而对昆虫脑结构与功能的研究已成为昆虫领域的研究热点，尤其是对昆虫嗅觉和味觉的研究有望为成功开发出昆虫的行为干扰剂提供有力的线索。而剖出脑是进行脑研究的前提。

当前，对昆虫脑的研究一般集中于幼虫和成虫脑。现有的对昆虫脑的解剖方法一般是切下头壳，在生理液中破坏脑壳解剖出脑，但是蛹期属于静息虫态，其体内进行着剧烈地旧组织解离新组织形成的代谢反应，因而内部通常是混沌的血浆状态。蛹内的脑则处于由幼虫脑（不发达，原始）发育成成虫脑的状态，不成熟脑外膜解离造成脑不成形，脑内部组织结构呈松散的絮状，采用现有的解剖方法难以解剖出完整的脑用于后续研究。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种针对冷冻致死且脑未损伤的鳞翅目昆虫蛹脑解剖方法，能够解剖出完整的脑组织，能最大程度的保证脑内神经细胞的活性，维持良好的组织形态，利于下一步实验。

本发明的目的是以下述方式实现的：

一种针对冷冻致死且脑未损伤的鳞翅目昆虫蛹脑解剖方法，包括以下步骤：切下蛹的头壳后，用冷凉的生理液冲洗头壳内血浆，露出脑后用固定液固定蛹头壳内脑，夹断附着头壳上的膜状物，然后把已成型的脑剖出，得到完整的脑组织。

具体步骤为：

（1）将冷冻致死且脑未损伤的鳞翅目昆虫蛹的头壳切下；

（2）用吸管吸取冷凉的生理液，冲洗掉蛹的头壳内未成形的血浆液，露出脑；

（3）滴加固定液固定脑10-30min，脑固定后，脑不再瘫软；

（4）夹断附着在头壳上的膜状物，去除脑周围的其他结构，得到完整的脑组织。

所有的操作均在冰上进行。

所述生理液为Ringer’s生理液。

所述固定液为甲醛、多聚甲醛或戊二醛。

所述脑组织由脑、咽下神经节组成。

相对于现有技术，本发明不破坏头壳，由于蛹内脑不成熟，仅仅有些絮丝与头壳连接，如果破坏头壳，则很容易拉扯絮丝并导致脑组织的破坏，本发明用镊子轻轻切断与头壳相连的絮丝状膜状物，从而保持脑组织结构完整，得到完整的鳞翅目昆虫蛹的脑，并完整地保持了脑内超微结构的原始状态，避免结构损伤，利于下一步实验得到良好的结果。

附图说明

图1是棉铃虫蛹完整的脑组织图（体视显微镜）。

图2是蛹头壳内部的脑（摄像机拍摄）。

具体实施方式

实施例1