[发明专利]多组分纳米颗粒簇的构建方法

权利要求书

1.一种纳米颗粒簇的构建方法，其特征在于，所述纳米颗粒簇为多组分纳米颗粒簇，且所述多组分纳米颗粒簇的构建方法，包括以下步骤：

分别提供N种锌指蛋白、M种纳米颗粒、N种蛋白标签以及用于识别不同所述蛋白标签的N种配体，其中，一种所述配体唯一识别一种对应的所述蛋白标签；N为大于等于2的正整数，M为大于等于2的正整数，且M小于等于N；

将一种所述纳米颗粒与至少一种所述蛋白标签交联，且一种蛋白标签只交联一种纳米颗粒，获取N种纳米颗粒/蛋白标签复合体；按唯一配对的关系将一种所述锌指蛋白与一种配体交联，获取N种锌指蛋白/配体复合体；

提供核苷酸序列，将所述核苷酸序列与所述N种纳米颗粒/蛋白标签复合体、N种锌指蛋白/配体复合体混合并孵育，通过配体与蛋白标签之间的一一对应关系，形成核苷酸序列-锌指蛋白-蛋白标签-纳米颗粒的连接体系，分离后收集得到的纳米颗粒簇，其中，所述核苷酸序列中的碱基按照预设的纳米颗粒簇中锌指蛋白的排列顺序设定。

2.如权利要求1所述的纳米颗粒簇的构建方法，其特征在于，将一种所述纳米颗粒与至少一种所述蛋白标签交联，且一种蛋白标签只交联一种纳米颗粒的步骤，包括：

提供EDC和NHS的储备液，配置蛋白标签的储备液和纳米颗粒溶液，将EDC和NHS的储备液、蛋白标签的储备液和纳米颗粒溶液进行混合，发生交联反应。

3.如权利要求2所述的纳米颗粒簇的构建方法，其特征在于，将EDC和NHS的储备液、蛋白标签的储备液和纳米颗粒溶液进行混合的步骤中，按照纳米颗粒、蛋白标签、EDC、NHS的摩尔比为1:（1-100）:（100-10000）:（100-10000）的比例，将各物质进行混合。

4.如权利要求1所述的纳米颗粒簇的构建方法，其特征在于，按唯一配对的关系将一种所述锌指蛋白与一种配体交联的步骤，包括：

提供TCEP的储备液，配置配体溶液和锌指蛋白的储备液，将TCEP的储备液、配体溶液和锌指蛋白的储备液混合，发生交联反应。

5.如权利要求4所述的纳米颗粒簇的构建方法，其特征在于，将TCEP的储备液、配体溶液和锌指蛋白的储备液混合的步骤中，按照锌指蛋白：TCEP：配体的摩尔比为1:(5-100):(1-200)的比例，将各物质进行混合。

6.如权利要求1所述的纳米颗粒簇的构建方法，其特征在于，将所述核苷酸序列与所述N种纳米颗粒/蛋白标签复合体、N种锌指蛋白/配体复合体混合并孵育的步骤中，将所述N种纳米颗粒/蛋白标签复合体与所述N种锌指蛋白/配体复合体混合反应后，收集锌指蛋白-蛋白标签-纳米颗粒复合体；然后将所述锌指蛋白-蛋白标签-纳米颗粒复合体与所述核苷酸序列混合孵育，制备纳米颗粒簇。

7.如权利要求6所述的纳米颗粒簇的构建方法，其特征在于，将所述锌指蛋白-蛋白标签-纳米颗粒复合体与所述核苷酸序列混合孵育的步骤，在温度为4-45℃的条件下，将所述锌指蛋白-蛋白标签-纳米颗粒复合体与所述核苷酸序列置于NaCl和ZnSO₄的缓冲溶液中，孵育15min以上。

8.如权利要求1至7任一项所述的纳米颗粒簇的构建方法，其特征在于，所述N、M均为2，两种锌指蛋白分别为第一锌指蛋白zif268和第二锌指蛋白SNAP；两种蛋白标签分别为SNAPtag和Halotag；两种配体分别为BG-Maleimide和HaloLigase-Maleimide，其中，BG-Maleimide用于识别SNAPtag，HaloLigase-Maleimide用于识别Halotag。