[发明专利]一种联苯菊酯单克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种联苯菊酯单克隆抗体，其特征在于：包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为：QVKLQQSGPGLVAPSQLQVSACTVSGLRSLSGVSWVRQPPGKLESWLGVIWSGRTNYHSALISRLTISKDNSKSQVFLNLNSLQIDDSATYYCVQRARLRWGVYNMDYWSQGTTVTVSS；所述轻链可变区的氨基酸序列为：DIELTQSPSSMYASLGERVTLTCKASQGINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGGSFGQDFSLTISSLEYEDLGIYYCLQYDEFPWTFGGGTKLEIKR；与现有技术相比，本发明的优点是：1)半抗原新颖；2)抗体性能突出；3)试纸条特异、灵敏、简便、快速；4)结果显示形象、直观、准确；5)节省费用，适用范围广，便于推广。

技术领域

本发明涉及农药残留免疫分析技术领域，具体涉及一种联苯菊酯单克隆抗体及其制备方法与应用。

背景技术

联苯菊酯(bifenthrin)又名天王星、虫螨灵、毕芬宁，是由FMC公司研制开发的一种拟除虫菊酯类杀虫、杀螨剂，用于防治棉铃虫、棉红蜘蛛、桃小食心虫、梨小食心虫、山楂叶螨、柑桔红蜘蛛、黄斑蝽、茶翅蝽、菜蚜、菜青虫、小菜蛾、茄子红蜘蛛、茶细蛾等20多种害虫。

目前，对农药残留的检测方法主要是仪器分析方法，包括高效液相色谱法(Highperformance liquid chromatography，HPLC)、气相色谱法(Gas chromatography，GC)、薄层色谱法(Thin layer chromatography，TLC)、液-质串联法(HPLC-MS)和气-质串联法(GC-MS)等。然而，这一类传统的检测方法通常需要贵重的仪器设备，并只能在实验室中进行。与仪器分析方法相比，免疫检测方法因其简便、经济、快速等优点而在农药残留检测领域中受到越来越多的关注。

ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法是常用的免疫检测方法，但是其却有操作步骤相对较多，检测时间较长，检测结果不够直观，不能在线进行检测等缺陷。因而ELISA在联苯菊酯的快速检测上的应用受到很大的限制。胶体金试纸条无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟即可判定结果，不仅操作简便、快速，且结果直观准确、成本低。但是，目前已报道的联苯菊酯抗体的敏感性均不高，基于该抗体制备的胶体金试纸条的灵敏度通常达不到实际检测的需要。

发明内容

本发明目的是：提供一种联苯菊酯单克隆抗体及其制备方法与应用。

本发明的技术方案是：一种联苯菊酯单克隆抗体，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为：QVKLQQSGPGLVAPSQLQVSACTVSGLRSLSGVSWVRQPPGKLESWLGVIWSGRTNYHSALISRLTISKDNSKSQVFLNLNSLQIDDSATYYCVQRARLRWGVYNMDYWSQGTTVTVSS；所述轻链可变区的氨基酸序列为：DIELTQSPSSMYASLGERVTLTCKASQGINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGGSFGQDFSLTISSLEYEDLGIYYCLQYDEFPWTFGGGTKLEIKR。

本发明还提供了一种联苯菊酯单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：将免疫半抗原偶联BSA制备得到免疫原；:

步骤2：用免疫原免疫BALB/c小鼠，以相同的免疫剂量免疫多次，免疫次数大于或等于5，首次免疫由等体积的免疫原和弗氏完全佐剂乳化，腹腔注射，之后用等体积免疫抗原和弗氏不完全佐剂乳化，且从第三次免疫开始，每次免疫后尾静脉采血，测定效价，选取效价最高的小鼠脾脏细胞；

步骤3：将骨髓瘤细胞SP2/0与步骤2中所得的效价最高的小鼠脾脏细胞进行细胞融合制备得到杂交瘤细胞；