[发明专利]改进的测定方法

权利要求书

1.一种检测样品中的目的分析物的方法，包括：

a.使分析物结合：(i)表面上的捕捉试剂，该表面包含针对该分析物的所述捕捉试剂，和包含锚定寡核苷酸序列的锚定试剂；(ii)针对该分析物的第一检测试剂，其连接于第一核酸探针；和(iii)针对该分析物的第二检测试剂，其连接于第二核酸探针；由此在表面上形成包含结合试剂、该分析物和所述第一和第二检测试剂的复合物；

b.利用需要所述第一和第二探针接近的延伸过程，延伸所述第二探针以形成延伸序列，其包含与所述锚定序列互补的锚定序列互补体；

c.将所述锚定序列与所述锚定序列互补体杂交；并

d.测量结合至表面的延伸序列的量。

2.权利要求1的方法，其中所述锚定寡核苷酸序列包含双链寡核苷酸序列。

3.权利要求1的方法，其中所述延伸序列还包含一个或多个经修饰的碱基，且所述测量步骤还包括使所述延伸序列与能够结合所述一个或多个经修饰的碱基的多种可检测模块接触。

4.权利要求3的方法，其中所述一个或多个经修饰的碱基包含适体、适体配体、抗体、抗原、配体、受体、半抗原、表位、或模拟位，且所述多种可检测模块各包含所述一个或多个经修饰的碱基的结合伴侣和可检测的标记。

5.权利要求4的方法，其中所述一个或多个经修饰的碱基包含链霉亲合素且所述多种可检测模块各包含生物素和可检测的标记。

6.权利要求4的方法，其中所述一个或多个经修饰的碱基包含生物素且所述多种可检测模块各包含链霉亲合素和可检测的标记。

7.权利要求4的方法，其中所述一个或多个经修饰的碱基包含亲合素且所述多种可检测模块各包含生物素和可检测的标记。

8.权利要求4的方法，其中所述一个或多个经修饰的碱基包含生物素且所述多种可检测模块各包含亲合素和可检测的标记。

9.权利要求1的方法，其中所述延伸步骤包括使所述探针结合模板核酸序列并通过聚合酶链式反应延伸该探针。

10.权利要求1的方法，其中在探针延伸后所述延伸的探针保持定位于所述表面上。

11.权利要求10的方法，其中所述复合物在该延伸步骤后保持结合于所述表面。

12.权利要求11的方法，其中所述延伸的探针在所述表面上复合物位置的10-100um以内的位置处结合于所述锚定试剂。

13.权利要求1的方法，其中所述延伸步骤包括PCR(聚合酶链式反应)、LCR(连接酶链式反应)、SDA(链置换扩增)、3SR(自维持合成反应)、或等温扩增方法。

14.权利要求13的方法，其中所述延伸步骤包括等温扩增方法。

15.权利要求14的方法，其中所述等温扩增方法是螺旋酶依赖性扩增或滚环扩增(RCA)。

16.权利要求1的方法，其中所述延伸过程包括使步骤(a)中形成的复合物与包含以下的连接体序列接触：(i)与所述第二探针互补的内部序列和(ii)与所述第一探针的非重叠性区域互补的两个端序列。

17.权利要求16的方法，其还包括将该连接寡核苷酸的所述两个端序列连接以形成与所述第二和第二探针两者杂交的环状靶序列。