[发明专利]一种禽网状内皮组织增殖症病毒特异性抗原多肽及应用

说明书

本发明所涉及的是禽网状内皮组织增殖症病毒特异性多肽抗原及其应用，其氨基酸序列为SEQ ID No.5，由病毒的囊膜蛋白gp90基因编码，并具有强的反应原性，该抗原表位具有很好的抗体反应性，可以用来特异性检测REV的抗体，具有临床检测的应用价值。用该多肽抗原免疫动物，可以制备特异性抗REV的抗体。

技术领域

本发明涉及一种禽网状内皮组织增殖症病毒特异性抗原多肽及应用。

背景技术

禽内皮组织增殖症病毒(REV)为反转录病毒科禽类C型反转录病毒，可引起急性、慢性肿瘤的形成，免疫抑制、矮小综合症等，给养禽生产带来巨大的经济损失。由于该病常常发生混合感染，使该病的防制变得十分困难。现在用于检测REV抗体的方法有IFA、ELISA等，然而不同试剂盒、不同方法检测的结果常出现差异，这主要是由于所用抗原的差异。过去常用的商品化ELISA试剂盒是应用提纯的病毒经适当处理，用于抗原包被，也有学者采用融合表达蛋白作为包被抗原，但这些方法常因为抗原的纯度问题引起批间差异较大或非特异性等问题。

ELISA检测技术的原理

ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体上进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，加入酶标底物后，底物被酶催化成有颜色的产物，产物的量与待检物的量直接相关，故可以根据用分光光度计(酶标仪)加以测定进行定量或定性的分析，由于酶的催化效率很高，间接放大了免疫反应的结果，使测定方法敏感度大大提高，该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明提供了一种特异性检测REV抗体的间接ELISA检测试剂盒。该方法提供了一种禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)特异多肽，并应用其建立检测REV的抗体。试剂盒包括，包被具有特异性反应性抗原多肽的酶标板，酶标抗体、10X洗涤液、阳性对照、阴性对照、底物缓冲液、TMB粉剂、TMB溶解液、双氧水溶液、终止液。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种禽网状内皮组织增殖症病毒特异性多肽抗原，其特征在于，具有SEQ ID No.5所示的氨基酸序列，或者具有SEQ IDNo.5经过一个或者多个氨基酸的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列，或者为SEQ IDNo.5经过偶联载体蛋白而形成的氨基酸衍生物。

该多肽抗原具有能特异性与REV的血清反应的反应原性。所述的多肽抗原为REV特异性的序列，与其它病毒的抗体不反应。

一种禽网状内皮组织增殖症病毒抗体的制备方法，利用禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)特异性多肽抗原免疫动物而制备得到禽网状内皮组织增殖症病毒抗体。

本发明还包括所述的禽网状内皮组织增殖症病毒特异性多肽抗原的直接ELISA试剂盒，间接ELISA试剂盒，dot-ELISA试剂盒或试纸条。

一种特异性检测REV抗体的间接ELISA检测试剂盒，包括包被具有特异性反应性抗原多肽的酶标板，酶标抗体(即酶标二抗)。还包括10X洗涤液、阳性对照、阴性对照、底物缓冲液、TMB溶解液、终止液。

本发明的技术方案就是选取与REV的多抗血清反应性最佳的多肽抗原，摸索最佳包被浓度及多抗血清、酶标二抗的最佳稀释度及孵育时间并确定临界值。

本领域的普通技术人员无需特别的实验即可理解，所述的ELISA检测法是指酶联免疫分析，即利用了多肽抗原可以特异性结合待检血清中的REV抗体，然后加入HRP标记的二抗检测，最后读取波长450nm或650nm的OD值，按照此方法便可检测出个体是否感染过REV，在临床上可以用于感染鸡群抗体水平的评估，或疫苗免疫后是否产生抗REV的抗体，以评价疫苗是否有REV的污染；其检测REV抗体的步骤包括：