[发明专利]一种定量检测茶树籽三萜皂苷的UPLC-UV-QTOF-MS/MS方法

权利要求书

1.一种定量检测茶树籽三萜皂苷的UPLC-UV-QTOF-MS/MS方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取待测样品干燥磨碎，过筛，以甲醇或乙醇水溶液提取，可直接用于检测；或将粗提取液浓缩后经过正己烷或石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将正丁醇相进一步用大孔树脂或沉淀法纯化总皂素部分，再进行检测；

(2)取茶树籽中已知的任意1个或多个皂素化合物，制备标准品溶液；

(3)将供试品溶液和标准品溶液高效液相色谱/紫外/质谱联用设备(UPLC-PDA-QTOF-MS/MS)，采用串联质谱进行结构鉴定，采用外标法在PDA检测器下进行定量检测：

色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(1.8μm,150mm×2.1mm i.d.,Waters)；

色谱条件为：流动相A(0.1％甲酸/水)，B相(0.1％甲酸/乙腈)；梯度洗脱，0-4min,梯度洗脱，(32-35％)–(35-38％)B；4-32min,等度洗脱(35-38％)B；32-58min,梯度洗脱，(35-38％)–(43-48％)B；58-60min,等度洗脱，(32-35％)B。柱温，25℃；流速，0.2-0.3mL/min；进样量，5μL；检测波长：205-215nm。

质谱条件为：采用负离子扫描模式；扫描范围：m/z 100-2000；雾化气(GS1)：50psi；雾化气(GS2)：50psi；气帘气(CUR)：35psi；离子源温度(TEM)：500℃；离子源电压(IS)：-4500V；一级扫描：去簇电压(DP)：100V；聚焦电压(CE)：10V；二级扫描：使用TOF MS～Product Ion～IDA模式采集质谱数据，CID能量为40、60和80V，进样前，用CDS做质量轴校正。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，甲醇或乙醇水溶液中醇浓度为60-80％，料液比为1:10-1:20，提取温度为70-90℃，提取方法为回流、超声、浸渍、渗漉、逆流。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，正己烷或石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取时比例各为1:1,3次；大孔树脂选用D101、AB-8等适用于中等极性化合物分离的树脂；洗脱采用20-95％的乙醇溶液进行梯度洗脱，每个浓度洗脱2-3个柱体积，收集50-70％乙醇洗脱部分作为总皂素；或将正丁醇相浓缩后采用甲醇或乙醇反复沉淀法得到总皂素。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，以茶树种子中发现的皂素Theasaponins、Assamsaponins、Teaseedsaponins、Floratheasaponins、Camelliasaponins中的一个或多个皂素单体作为标准品，制作标准曲线，进行定量。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，采用ACQUITY UPLC HSST3色谱柱(1.8μm,150mm×2.1mm i.d.,Waters)色谱柱。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，色谱条件为：流动相A(0.1％甲酸/水)，B相(0.1％甲酸/乙腈)；梯度洗脱，0-4min,梯度洗脱，(32-35％)–(35-38％)B；4-32min,等度洗脱(35-38％)B；32-58min,梯度洗脱，(35-38％)–(43-48％)B；58-60min,等度洗脱，(32-35％)B。柱温，25℃；流速，0.2-0.3mL/min；进样量，5μL；检测波长：205-215nm。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，质谱条件为：采用负离子扫描模式；扫描范围：m/z 100-2000；雾化气(GS1)：50psi；雾化气(GS2)：50psi；气帘气(CUR)：35psi；离子源温度(TEM)：500℃；离子源电压(IS)：-4500V；一级扫描：去簇电压(DP)：100V；聚焦电压(CE)：10V；二级扫描：使用TOF MS～Product Ion～IDA模式采集质谱数据，CID能量为40、60和80V，进样前，用CDS做质量轴校正。