[发明专利]一种免疫组化染色液及其应用

说明书

本发明涉及一种免疫组化染色液及其应用，免疫组化染色液为含有分开保存的染色A液和染色B液的2液型染色液，染色A液包含二氨基联苯胺、丙二醇、焦亚硫酸钠、Tween‑20和醋酸盐缓冲液，染色B液包含双氧水、金属螯合剂、聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂、木糖和咪唑缓冲液，所述金属螯合剂选自四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾中任一种。本发明还提供了上述免疫组化染色液在免疫组化染色中的应用。本发明的染色液的染色A液和染色B液混合后可在常温下稳定存续23小时以上，且染色时背景着色少，染色效果好，方便使用。

技术领域

本发明涉及免疫组化技术领域，具体涉及一种免疫组化染色液及其应用。

背景技术

免疫组化染色是引入附有标记物的外源抗体或抗原，使之锚定于组织或细胞标本中相应的抗原(或抗体)部位，标记物经呈色反应而现实待检抗原或抗体，过氧化物酶是经常使用的一种标记酶，通常使用辣根过氧化物酶，作为辣根过氧化物酶反应的氢供体，日常使用的是显色为茶色的含有二氨基联苯胺(DAB)及过氧化氢的含DAB底物溶液。含DAB底物溶液通常分成两液或三液，即将DAB和过氧化氢分开，避免DAB发生反应，使用时，再将分开保存的两液或三液混合，必须现用现配，并且背景着色深，使用麻烦。

发明内容

本发明为了解决上述技术问题，提供了一种在常温下可稳定存续时间长，背景着色少的的免疫组化染色液。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种免疫组化染色液，其为含有分开保存的染色A液和染色B液的2液型染色液；所述染色A液包含二氨基联苯胺(DAB)、丙二醇、焦亚硫酸钠、Tween-20和醋酸缓冲液；所述染色B液包含双氧水(H₂O₂)、金属螯合剂、聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂、木糖和咪唑缓冲液，所述金属螯合剂选自四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾中任一种。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)。

进一步，所述聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂选自聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)、聚氧乙烯鲸蜡基醚(Brij 58)、聚氧乙烯硬酯基醚、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚、聚氧乙烯辛基十二烷基醚中的任一种。

进一步，所述聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂为聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)。

进一步，所述染色A液中二氨基联苯胺(DAB)、丙二醇、焦亚硫酸钠和Tween-20的浓度分别为45～55mg/mL、75％～85％(v/v)、0.8～1.2mM、0.09％～0.12％(v/v)，余量为醋酸盐缓冲液，所述醋酸盐缓冲液的浓度为0.5～1.5M，pH为5～6。

进一步，所述双氧水、乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)、聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)和木糖的工作浓度分别为0.02％～0.04％(v/v)、1.5～2.5mM、3～4mM和45～55mM，余量为咪唑缓冲液，所述咪唑缓冲液的浓度为0.01～0.05M，pH为7～8。

进一步，所述染色液A液与所述染色B液的体积比为1:90～105。

本发明还提供了上述免疫组化染色液在免疫组化染色中的应用，所述免疫组化染色为使用过氧化物酶标记抗体的免疫组化染色。

本发明的有益效果是：现有的含有DAB和过氧化氢的染色液为了避免DAB的自氧化反应，使用时将分开保存的溶液混合，混合后无法长时间保存，必须现用现配，而本发明的染色液的染色A液和染色B液混合后可在常温下稳定存续23小时以上，且染色时背景着色少，染色效果好，方便使用。

附图说明

图1为本发明试验例1中免疫组化染色液自氧化情况；