[发明专利]一种抗人CKMB的抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种新颖的包含CKMB抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与人CKMB蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于CKMB蛋白的检测领域。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学技术领域，尤其是涉及一种抗人CKMB的抗体及其应用。

背景技术

肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes，CK)有四种同功酶形式：肌肉型(MM)、脑型(BB)、杂化型(MB)和线粒体型(MiMi)。MM型主要存在于各种肌肉细胞中，是由两个相同的亚基组成的二聚体，BB型主要存在于脑细胞中，MB型主要存在于心肌细胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。CKMB(杂化型肌酸激酶同工酶)通常分为MB1与MB2两个异型，在心肌细胞中，CKMB主要以MB2的形式存在，一旦心肌细胞发生损伤就会释放MB2，使血清中的CKMB水平在短时间内迅速升高，其升高时间通常于发病6h内，且在24h左右达到峰值，并于72h后逐渐降低，直至恢复正常水平，这表明CK-MB可于早期反映出心肌受损情况。由于CKMB在诊断急性心肌梗死中的敏感性和特异性比较高，经过多年的深入研究和临床分析，血清中CKMB升高已成为公认的诊断急性心肌梗死和确认有无心肌坏死的重要指标，具有较高的诊断准确率，可在临床中推广使用。特别是各级医院中对于急性心肌梗死患者的溶栓治疗以及急诊经皮冠状动脉介入治疗的使用越来越广泛，这就要求必须要对急性心肌梗死进行早期诊断。

目前在临床实验室多采用免疫抑制法测定CKMB，该方法简单迅速，但特异性差。其检测原理是通过抗CK-M抗体，使M亚基活性受到抑制，对B亚基的活性进行检测，因为CKBB在健康人体中的含量极少，可直接忽略，将所测结果乘以2，即可获得血液中CKMB的活性。该方法具有操作简单、检测速度快、成本低等优势，在临床实验室检验中被广泛应用。但后来发现，肌肉分解和一些非心脏疾病均可导致B亚基含量升高从而带来CKMB的假性增加，因此，酶质量法在准确性上有更明显的优势。

酶质量法采用化学免疫发光技术进行定量检测，以双抗体夹心法为主，使抗人CKMB抗体包被于磁微粒等固相载体，其标记物为酶标抗人CKMB抗体，对CKMB进行定量分析检测。该检测方法对抗原抗体反应具有较高的特异性，与CKBB及CKMM无交叉反应，具有更高的灵敏度，不受血清中巨CK及其他酶类等因素的影响。

要实现对CKMB快速、准确的检测必须要有对CKMB高度灵敏、高特异性的单克隆抗体。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及一种新颖的包含CKMB抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。

所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与CKMB具有K_D≤8.57×10^-9mol/L的亲和力；

互补决定区CDR-VH1为G-X1-S-X2-T-T-G-X3-D-R，其中，

X1是I、V或L，X2是L或I，X3是S或T；

互补决定区CDR-VH2为I-X1-Y-S-G-T-X2-T-Y-N-P-S-X3-T-S，其中，

X1是F或Y，X2是L、V或I，X3是L、V或I；

互补决定区CDR-VH3为R-E-X1-T-Y-Y-X2-Y-G-Y-F-D-V-X3-G，其中，

X1是K或R，X2是P、A或G，X3是F或W；

互补决定区CDR-VL1为H-X1-S-X2-N-I-N-X3-W-L-S，其中，

X1是A或G，X2是N或Q，X3是I、V或L；