[发明专利]基于还原方法标记发光指示物的缪勒氏管激素测定试剂盒

说明书

本发明涉及抗原检测领域，具体而言，涉及一种基于还原方法标记发光指示物的缪勒氏管激素测定试剂盒。该试剂盒包括固相支持物以及AMH捕获探针；所述固相支持物上包被有AMH第一抗体；所述AMH捕获探针为标记有化学发光类信号强度指示剂的AMH第二抗其中所述AMH第二抗体标记所述化学发光类信号强度指示剂的方法包括：使用还原剂切断所述AMH第二抗体的二硫键暴露出巯基，再将所述化学发光类信号强度指示剂通过能够连接巯基功能基团标记于所述AMH第二抗体上。使用该试剂盒检测AMH，稳定性好、灵敏度高、线性范围广。

技术领域

本发明涉及抗原检测领域，具体而言，涉及一种基于还原方法标记发光指示物的缪勒氏管激素测定试剂盒。

背景技术

抗缪勒管激素(Anti-mullerian hormone，AMH)是一种属于转化生长因子β(TGFβ)家族的二聚体糖蛋白。这一超级家族的所有成员都参与调节组织生长和分化。在分泌之前，激素经过糖基化和二聚化，生成大约140kDa前体的两个相同的二硫键的70kDa亚基。每个单体都含有一个大型N末端前区和一个小得多的C末端成熟域。与其他TGFβ家族成员相反，AMH被认为需要N末端域增强C末端域的活性，以得到完整的生物活性。随后一部分AMH在胞浆转运过程中，在前区和成熟域之间的某个位点切开，生成具有生物活性的110kDa N-末端和25kDa C-末端同型二聚体，仍与非共价复合物有关联。AMH II型受体(AMH RII)仅结合具有生物活性的AMH。

在男性中，AMH由睾丸的支持细胞分泌。在男性的胚胎发育中，睾丸支持细胞的AMH分泌负责缪勒管的衰退和男性生殖道的正常发育。支持细胞的AMH分泌在胚胎发生的过程中开始，并持续终生。AMH从睾丸中持续生成直至青春期，随后缓慢减少至青春期后水平。在女性中，AMH在卵巢的卵泡发育中发挥重要作用。卵巢中的卵泡发育包括两个不同的阶段：起始招募阶段，此时初始卵泡开始成熟，并循环招募，促进一系列小囊状卵泡生长，随后选出其中的优势卵泡(排卵用)。FSH指导循环招募。粒层细胞中的AMH表达开始于初级卵泡，在腔前的粒层细胞中达到最高，且小窦状卵泡直径最大约为6mm。当卵泡生长开始依赖FSH，AMH表达消失且无法检测出。这种表达形式的AMH能够支持AMH在卵泡发育两个不同阶段的抑制作用。第一，AMH抑制卵泡从初始阶段转变为成熟阶段，进而在调节初始卵泡池中的剩余卵泡数量中发挥重要作用。第二，AMH能够抑制卵泡对FSH的灵敏度，因此在卵泡选择过程中发挥作用。

AMH的血清水平在女性出生时几乎检测不出，在青春期后达到最高水平。之后随着年龄增长逐步下降，在停经后无法检测出血清AMH水平经表明在月经周期过程中相对稳定，较年轻女性中观察到显著波动。进一步证明AMH水平在周期内和周期间的波动变化低于基值FSH。血清AMH水平在使用复合避孕药物时显著降低。AMH检测的临床应用推荐用于多种指征的预示。血清AMH检测在临床上主要被用于评估卵巢储备，以反映窦前卵泡的数量，即所谓的卵泡数目(AFC)，以及用来预示对控制性促排卵的反应。AMH的进一步临床应用是诊断儿童的性发育疾病(DSD)和监控颗粒细胞瘤，以检测残留或复发性疾病。AMH被建议作为AFC的替代标记物，来诊断多囊性卵巢综合征(PCOS)和预测停经时间。

AMH最早的商业化试剂盒是由Anshlabs公司研发的酶免试剂盒，并且该试剂盒是应用Anshlab公司AMH专利抗体研发的N端-配C端鼠单克隆抗体酶免试剂盒。针对中国市场，2013年由广州康润最早注册了酶联免疫法的AMH商业化试剂盒，2015年深圳亚辉龙同时注册了酶联免疫法、吖啶酯化学发光法的AMH商业化试剂盒，并且亚辉龙公司申请了关于化学发光的专利(专利号：CN201610512550.0)，2017年深圳迈瑞公司注册了碱性磷酸酶方法学的化学发光AMH商业化试剂盒,并且深圳微点公司、南京诺维赞分别与2017年、2018年注册了免疫荧光法、量子点免疫荧光法的AMH商业化试剂盒。针对进口试剂，罗氏诊断于2015年注册了该项目的电化学方法的商业化试剂盒，贝克曼公司于2017年注册了该项目碱性磷酸酶方法学的商业化试剂盒。