[发明专利]一种植物样品中内源性磷酸糖类化合物的前处理方法及定量检测方法

权利要求书

1.一种植物样品中内源性磷酸糖类化合物的前处理方法，其特征在于主要包括以下步骤：

1)在植物样品中定量加入磷酸糖的同位素内标，然后以溶剂提取，得到植物样品提取溶液；

2)将步骤1)所得植物样品提取溶液用氮气吹干，之后用硼酸缓冲溶液复溶，所得复溶溶液通过反相SPE小柱并收集流出液；

3)向步骤2)所收集的流出液中加入重氮衍生化试剂进行化学衍生，实现对磷酸糖化合物的衍生标记，之后经振荡、离心后，得到上清液，即完成对植物样品中内源性磷酸糖类化合物的前处理，所述上清液直接用于高效液相色谱-串联质谱进行分析检测。

2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于所述重氮衍生化试剂的结构通式如式1所示，

N₂＝A-B 式1

其中A为喹啉甲基或苯甲基，当A为喹啉甲基时，B即为氢原子；当A为苯甲基时，B可为氨基或伯胺基团。

3.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于步骤1)中溶剂提取步骤分为两步，先以脂溶性溶剂溶解植物样品中的脂溶性杂质，随后加入水提取磷酸糖类化合物。

4.根据权利要求3所述的前处理方法，其特征在于所述脂溶性溶剂的为选自三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯、乙醚、正己烷、乙酸乙酯中一种或几种与乙腈的混合溶液，其中乙腈占脂溶性溶剂的体积比的范围为50％-70％。

5.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于步骤1)中所得样品提取溶液体积与步骤2)中反相SPE小柱填料的质量比值在(2-20)μL：1mg之间。

6.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于步骤2)中，硼酸缓冲溶液中硼酸盐浓度为40-100mM，pH范围为5.5-7.0。

7.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于步骤3)中，重氮衍生化试剂溶解于二甲亚砜中形成重氮衍生化试剂溶液，浓度范围在0.014-0.1mM之间。

8.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于步骤2)中所收集得通过反相SPE小柱的流出液与步骤3)中加入重氮衍生化试剂的溶液的体积比在2：3至3：2之间。

9.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于步骤3)中进行化学衍生时，反应温度为4-25℃之间，pH在5.5-7之间，反应时间在30-180min之间。

10.一种植物样品中内源性磷酸糖的定量分析检测方法，其特征在于将权利要求1所述前处理方法所得上清液通过分析仪器采集响应信号或者数据，进而采用稳定同位素内标结合标准曲线定量法测定植物样品中内源性磷酸糖的含量；其中，分析仪器采用液相色谱-质谱仪联用，色谱柱采用亲水色谱柱。