[发明专利]一种鱿鱼II型明胶双网络水凝胶的制备方法及应用

权利要求书

1.一种鱿鱼II型明胶双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将甲基丙烯酸酯修饰的透明质酸HAMA溶解于生物相容性介质，再向其中依次加入光敏剂I2959和鱿鱼II型明胶，用碱性溶液调节pH值至弱碱性，得到混合液A，所述混合液A中甲基丙烯酸酯修饰的透明质酸的浓度为0.6％～6％(w/w)，光敏剂I2959的浓度为0.06％～0.6％(w/w)，鱿鱼II型明胶的浓度为22.5％～45％(w/w)；

(2)将四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺酯4-Arm PEG-SS溶解于生物相容性介质得到PEG溶液，所述PEG溶液中4-Arm PEG-SS的浓度为9％～15％(w/w)；

(3)将所述步骤(2)得到的PEG溶液与所述步骤(1)得到的混合液A混合，所述混合液A中的鱿鱼II型明胶的氨基与4-Arm PEG-SS的羧基发生反应，形成酰胺键交联，得到双网络水凝胶中的第一道网络，所得产物中，鱿鱼II型明胶的终浓度为15％～30％(w/w)，4-ArmPEG-SS的终浓度为3％～5％(w/w)，HAMA的终浓度为0.4％～4％(w/w)，I2959的终浓度为0.04％～0.4％(w/w)；

(4)用365nm波长的紫外光照射步骤(3)得到的水凝胶，利用光引发使所述甲基丙烯酸酯修饰的透明质酸的双键聚合反应成胶，使水凝胶的第二道网络完成交联，得到用于制备肋软骨缺损修复材料的鱿鱼II型明胶-[4-Arm PEG-SS]-HAMA双网络水凝胶。

2.根据权利要求1所述的一种鱿鱼II型明胶双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中鱿鱼II型明胶的制备方法为，将鱿鱼软骨冻干，粉碎，在室温条件下加入EDTA溶液缓慢搅拌，离心后用去离子水清洗沉淀，再加入NaOH溶液缓慢搅拌，离心并清洗沉淀后，依次加入乙酸溶液和胃蛋白酶，在37℃条件下缓慢搅拌水解，然后升温至50℃保持一段时间，过滤，透析后将胶液真空冷冻干燥，得到鱿鱼Ⅱ型明胶。

3.根据权利要求1所述的一种鱿鱼II型明胶双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)混合液A中HAMA的浓度为1.5％(w/w)；光敏剂I2959的浓度为0.15％(w/w)；鱿鱼II型明胶的浓度为30％～45％(w/w)。

4.根据权利要求1所述的一种鱿鱼II型明胶双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(3)所得水凝胶的第一道网络中，鱿鱼II型明胶的终浓度为20％～30％(w/w)，4-ArmPEG-SS的终浓度为5％(w/w)；步骤(4)所得水凝胶的第二道网络中，HAMA的终浓度为1％(w/w)，I2959的终浓度为0.1％(w/w)。

5.根据权利要求1所述的一种鱿鱼II型明胶双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，所述生物相容性介质选自蒸馏水、生理盐水、缓冲液和细胞培养基溶液中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的一种鱿鱼II型明胶双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，所述混合液A与PEG溶液的体积比为2:1。

7.根据权利要求1所述的一种鱿鱼II型明胶双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(4)中光照所使用的光源波长为365nm；光照时间为2～5分钟；光源与水凝胶之间的距离为3cm。

8.利用权利要求1—7任一所述制备方法制备获得的鱿鱼II型明胶双网络水凝胶在制备肋软骨缺损修复材料中的应用。