[发明专利]一种脊尾白虾性别连锁标记及性别检测方法

说明书

本发明提供了一种脊尾白虾性别连锁标记及性别检测方法，所述检测方法的过程为：提取脊尾白虾肌肉组织基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增反应；对PCR扩增产物进行纯化、测序；将测序结果与所述脊尾白虾性别连锁标记的DNA序列进行比对，若测序图谱显示为杂峰则为雌性，测序图为单峰且与标记序列一致则为雄性。本发明所述检测方法操作简便，对样品要求相对较低，鉴定结果稳定，且不受组织特异性和环境影响。能够方便快捷且相对准确的鉴定出脊尾白虾的遗传性别。具有良好的市场应用前景。

技术领域

本发明属于水产动物生物学技术领域，具体涉及一种脊尾白虾性别连锁标记及性别检测方法。

背景技术

脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)又名白虾、五须虾、迎春虾，隶属于甲壳纲、十足目、游泳亚目、长臂虾科、白虾属，分布于中国大陆沿岸和朝鲜半岛西岸的浅海低盐水域，以渤海和黄海产量最大，为重要的小型经济虾类。其肉质细嫩、味道鲜美，是一种高蛋白、低脂肪、富含矿物质的食品。除供鲜食以外，还可以加工成海米，因其呈金黄色，也有“金钩虾米”之称。其受精卵可干制成虾籽，也是上乘的海味干品。脊尾白虾雌虾生长速度快于雄虾，为提高养殖效益，急需突破该虾全雌或高雌性比苗种培育和鉴定方法，其关键技术之一是获取与脊尾白虾性别紧密连锁的分子标记。目前尚未见脊尾白虾性别连锁分子标记的报道。

发明内容

本发明针对背景技术中提到的问题，提供了一种脊尾白虾性别连锁标记及性别检测方法。利用本发明的技术方案，可以简便快捷的确定脊尾白虾的性别。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种脊尾白虾性别连锁标记，其具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

本发明还提供了利用所述的脊尾白虾性别连锁标记的性别检测方法，它包括以下步骤：

1）提取脊尾白虾肌肉组织的基因组DNA；

2）以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增反应；

3）对PCR扩增产物进行纯化、测序；将测序结果与所述脊尾白虾性别连锁标记的DNA序列进行比对，若测序图谱显示为杂峰则为雌性，测序图为单峰且与标记序列一致则为雄性。

进一步的：所述步骤1）中选取质量和完整性均较好的基因组DNA，用灭菌ddH₂O稀释到60-80ng/μL。

进一步的：所述步骤2）中PCR扩增的引物为：

p-SEXF：5′- GATGTTGTGACCCCAGTTTGT -3′；

p-SEXR：5′- TGGGTGGAGAGGAGGATTG -3′。

进一步的：所述步骤2）中PCR反应程序为：95℃，2min；95℃，20s；55℃，20s；72℃，30s；35个循环；72℃，5min。

进一步的：所述步骤2）中PCR反应体系为：DNA模板1μL；Pfu Fly Buffer 4μL；dNTP1.6μL；上下游引物各0.8μL；Pfu酶0.4μL；灭菌水补至20μL。

与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：本发明提供了一种脊尾白虾性别连锁分子标记并建立了性别检测方法，过程为：提取脊尾白虾肌肉组织基因组DNA，以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增反应；对PCR扩增产物进行纯化、测序；将测序结果与所述脊尾白虾性别连锁标记的DNA序列进行比对，若测序图谱显示为杂峰则为雌性，测序图为单峰且与标记序列一致则为雄性。该方法操作简便，对样品要求相对较低，鉴定结果稳定，且不受组织特异性和环境影响。能够方便快捷且相对准确的鉴定出脊尾白虾的遗传性别。

附图说明