[发明专利]长链二元酸生产菌株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种长链二元酸生产菌株，其分类命名为假丝酵母菌(Candida sp.)TDTC018，其保藏编号为：CGMCC No.16659。

2.根据权利要求1所述的长链二元酸生产菌株，其特征在于所述假丝酵母菌的等位基因CandidaA01681和CandidaA04617之一被敲除，所述等位基因的碱基序列如序列表的序列5和序列6所示。

3.如权利要求1所述的长链二元酸生产菌株的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)准备引物PEX11-F和PEX11-R；

(2)准备长链二元酸生产菌株感受态细胞；

(3)使用步骤(1)中的引物进行扩增clonNAT抗性基因，利用扩增的产物对菌种中的等位基因CandidaA01681和CandidaA04617之一进行敲除，所述等位基因的碱基序列如序列表的序列5和序列6所示；

(4)通过PCR扩增、纯化、电转、筛选、鉴定，得到本发明的长链二元酸生产菌株。

4.根据权利要求3所述的长链二元酸生产菌株的制备方法，其特征在于所述筛选步骤中使用的筛选标记为clonNAT。

5.根据权利要求3所述的长链二元酸生产菌株的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中的长链二元酸生产菌株为假丝酵母(Candida sp.)DC12。

6.如权利要求1所述的长链二元酸生产菌株在生产长链二元酸中的应用。

7.如权利要求6所述的长链二元酸生产菌株在生产长链二元酸中的应用，其特征在于发酵结束后，将发酵液加热至70～80℃；再将pH调至9～9.5，除去菌体沉淀，保留上清；脱色，温度保持在70～90℃，得到滤清液，用酸酸化至pH2.5，70～90℃保温，冷却，离心或压滤，水洗，清洗后的沉淀取出后真空干燥，得到长链二元酸。