[发明专利]球孢白僵菌三级培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种球孢白僵菌三级培养基及其制备方法，该球孢白僵菌三级培养基，包括按重量份计的以下原料：谷壳20‑30份、麦麸20‑30份、土霉素0.001‑0.01份和水30‑50份。还可以包括KH₂PO₄。通过在培养基配方及所用水中增加土霉素，杀灭自来水中的大部分微生物，进一步保证白僵菌5‑7天生长期培养基低微生物环境状态，让白僵菌在开放式环境中成优势菌种生长。采用本发明提供的培养基进行三级培养，生产的球孢白僵菌高孢粉最高达2300亿/克。

技术领域

本发明涉及白僵菌制备领域，具体为一种球孢白僵菌三级培养基及其制备方法。

背景技术

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)为子囊菌类的真菌，可工业化培养生产，利用其产生的分生孢子加工成微生物杀虫剂。白僵菌高孢粉无毒无味，无环境污染，对害虫具有持续感染力，害虫一经感染可连续浸染传播；可寄生15个目149个科的700余种昆虫，对人畜和环境比较安全、害虫一般不易产生抗药性、可与某些化学农药(杀虫剂、杀螨剂、杀菌剂)同时使用。在中国白僵菌防治最成功的是森林、苗圃、草坪、农田等的蛴螬、玉米螟、松毛虫、茶小绿叶蝉等农林害虫，是二十一世纪首选的绿色环保高效生物杀虫药剂之一。目前市场上生产的白僵菌孢子粉含孢率1000亿/克左右，且产量低，杂菌多，培养基的选择对其有很多的影响。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种球孢白僵菌三级培养基及其制备方法，能够减少杂菌的产生，提高白僵菌产量和质量。

本发明采取的技术方案是，一种球孢白僵菌三级培养基，包括按重量份计的以下原料：谷壳20-30份、麦麸20-30份、土霉素0.001-0.01份和水30-50份。

优选地方案中，谷壳25份、麦麸25份、土霉素0.006份、水40份。

进一步地，所述原料还包括KH₂PO₄。

进一步地，所述KH₂PO₄加入量为1×10^-5～5×10^-5份。

进一步地，所述水采用自来水加入土霉素混合而成，加入比例为1kg水中加入0.1-0.2g土霉素。自来水与土霉素混合后放置10-20min后使用。

本发明还涉及制备所述培养基的方法，包括以下步骤：

将谷壳和麦麸进行高温灭菌，然后在无菌环境中混合均匀，混合物料在60℃以下时加部分水混合，混合物料在30℃以下时加入其它原料及白僵菌三级菌种菌液，混合均匀后得到球孢白僵菌接种后的三级培养，即白僵菌固体浅盘扩大培养。谷壳和麦麸分别用编织袋装袋进行常压高温灭菌。

进一步地，第一次加水时，用量为总用水量的2/3，后一次加水时为总用水量的1/3。分量分次加水的目的在于，第一次加水有效降低三级料温，第二次降料温及均匀混合菌液及其它原料。

进一步地，所述三级菌种菌液的加入比例是菌液质量与谷壳麦麸质量比为1：4-6。

本发明还涉及所述的培养基进行三级培养的方法，接种后的三级培养基在培养盘中进行铺料，先在室内培养，温度为26-30℃，湿度90-98％，培养时间为5-7天，待白僵菌长满后，移至开放式环境进行自然干燥，得到含白僵菌的物料。

进一步地，整个培养过程中，温度控制在30℃以下，干燥过程中，增加散照光。

本发明具有以下有益效果：

1.通过在培养基配方及所用水中增加土霉素，杀灭自来水中的大部分微生物，进一步保证白僵菌5-7天生长期培养基低微生物环境状态，让白僵菌在开放式环境中成优势菌种生长。此处无需采取高温高压灭菌，在工厂大批量生产的条件下，进行少量土霉素简单杀灭大部分微生物，低成本消耗。