[发明专利]一种改性伊利石粉微生物菌剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种改性伊利石粉微生物菌剂，其特征在于，包括如下重量份组分：吸附载体75-85份，混合菌发酵产物15-25份；其中，所述吸附载体为伊利石粉负载水溶性壳聚糖或其衍生物后通过乙醇改性而成；所述混合菌发酵产物为木糖氧化无色杆菌、少动鞘氨醇单胞菌和巨大芽胞杆菌的原始菌种在无菌条件下分别依次经斜面培养、摇床培养后共同接种于液体发酵培养基经发酵罐混合培养后，进行离心、浓缩干燥后所得，所述混合菌发酵产物活菌数为200-300亿cfu/mL；

所述吸附载体具体制备方法为：将所述水溶性壳聚糖或其衍生物溶于水中，搅拌，然后添加所述伊利石粉，充分浸润后搅拌20-40min，添加质量分数为70％-90％的乙醇溶液，得混合凝聚物，混合凝聚物经去离子水洗涤、过滤或离心、烘干后得吸附载体；其中，所述水溶性壳聚糖或其衍生物与所述伊利石粉的质量比满足5-10：1；

所述混合菌发酵产物的具体制备方法包括如下步骤：

a.斜面培养：将所述木糖氧化无色杆菌、少动鞘氨醇单胞菌、巨大芽胞杆菌的原始菌种分别在无菌条件下接种于斜面培养基上，28-32℃条件下培养16-24h；

b.摇床培养：将步骤a培养的斜面菌种在无菌条件下分别接种于种子培养基中，28-32℃、140-200r/min条件下培养14-18h；

c.发酵罐混合培养：将步骤b培养好的木糖氧化无色杆菌、少动鞘氨醇单胞菌、巨大芽胞杆菌种子液在无菌条件下共同接种于液体发酵培养基中，接种量均为8％-20％，在pH6.5-7.2、罐压0.05～0.06MPa、28-32℃、通风量1：0.4～0.6vvm的条件下，培养48-56h后，检测活菌数达到20-30亿cfu/mL时，进行离心、喷雾干燥浓缩，得混合菌发酵产物。

2.根据权利要求1所述的改性伊利石粉微生物菌剂，其特征在于，所述斜面培养基配方(g/L)为：牛肉浸膏3.0，蛋白胨5.0，氯化钠5.0，琼脂粉18.0，pH 7.0±0.1；

和/或，所述种子培养基配方(g/L)为：葡萄糖10.0，蛋白胨10.0，酵母膏5.0，pH 7.0±0.1；

和/或，所述发酵培养基配方(g/L)为：玉米淀粉5.0-8.0，麸皮粉5.0-8.0，蛋白胨1.0-3.0，酵母膏1.0-3.0，碳酸钙0.5-1.5、磷酸二氢钾0.5-1.5，硫酸镁0.3-0.5、pH 7.0±0.1。

3.根据权利要求1所述的改性伊利石粉微生物菌剂，其特征在于，所述水溶性壳聚糖或其衍生物为壳聚糖、羧甲基壳聚糖、壳聚糖盐酸盐、壳聚糖季铵盐、羟丙基壳聚糖、小分子壳聚糖中的一种或几种。

4.一种如权利要求1-3任一项所述的改性伊利石粉微生物菌剂的制备方法，其特征在于，将所述吸附载体和混合菌发酵产物按重量份比例混合搅拌而成。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述吸附载体的制备方法为：将所述水溶性壳聚糖或其衍生物溶于水中，搅拌，然后添加所述伊利石粉，充分浸润后搅拌20-40min，添加质量分数为70％-90％的乙醇溶液，得混合凝聚物，混合凝聚物经去离子水洗涤、过滤或离心、干燥后得吸附载体；其中，所述水溶性壳聚糖或其衍生物与所述伊利石粉的质量比满足5-10：1。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述混合菌发酵产物的制备方法包括如下步骤：

a.斜面培养：将所述木糖氧化无色杆菌、少动鞘氨醇单胞菌、巨大芽胞杆菌的原始菌种分别在无菌条件下接种于斜面培养基上，28-32℃条件下培养16-24h；

b.摇床培养：将步骤a培养的斜面菌种在无菌条件下分别接种于种子培养基中，28-32℃、140-200r/min条件下培养14-18h；

c.发酵罐混合培养：将步骤b培养好的木糖氧化无色杆菌、少动鞘氨醇单胞菌、巨大芽胞杆菌种子液在无菌条件下共同接种于液体发酵培养基中，在pH 6.5-7.2、罐压0.05～0.06MPa、28-32℃、通风量1：0.4～0.6vvm的条件下，培养48-56h后，检测活菌数大于20-30亿cfu/mL时，进行离心、喷雾干燥浓缩，得混合菌发酵产物。