[发明专利]组合物、含有该组合物的细胞活性的检测试剂及细胞活性的检测方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及组合物、含有该组合物的细胞活性的检测试剂及细胞活性的检测方法。本发明提供的细胞活性检测的组合物和试剂，用使促肝细胞生长素表现出一定的刺激指数。用RPMI‑1640培养基(‑Gln)替代RPMI‑1640培养基(+Gln)，+Gln的存在会促进细胞的生长代谢，影响药物本身的作用。通过改变检测血清的种类，使促肝细胞生长素表现出明显的刺激指数。用四季青的新生牛血清替代Gibco的胎牛血清，刺激指数从1.2提升到4.6以上。实验结果表明，细胞浓度为2.5×10⁴/mL～4.0×10⁴/mL，培养3.5小时，促肝细胞生长素肠溶胶囊作用于L02正常肝细胞的活性检测方法表现出很高的刺激指数。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及组合物、含有该组合物的细胞活性的检测试剂及细胞活性的检测方法。

背景技术

在生物活性检测方面，由于癌细胞具有无限增殖的能力，且稳定性较好，相对于正常细胞难培养、传代次数少，因此其在体外活性检测方面具有广泛的应用。在促肝类药物体外活性检测方面，目前应用的较多的细胞有SMMC7721，MHCC-97L，HepG2，Huh7，Bel7402等等，这些肝癌细胞基因存在着大量的突变，其在遗传性，代谢途径，生长习性，细胞形态等都和正常肝细胞相差较大。虽然肝癌细胞在生物活性检测方面具有巨大的优势，但药物对肝癌细胞具有作用并不一定能说明其对正常肝细胞具有作用，在活性检测方面肝癌细胞并不能很好的替代正常肝细胞来说明某一类药物对肝脏具有的作用。

L02细胞是一种贴壁生长的人正常肝细胞，容易培养，稳定性好，且传代次数多，相比于肝癌细胞在促进细胞增殖、活性机理研究、代谢调控等方面更接近于正常的肝组织，从而说明药物对肝脏的作用。

L02细胞在研究肝功能方面应用广泛，在肝损伤机制，肝细胞凋亡通路，糖脂代谢等方面都有相关文献报道，但未见促肝类药物促进肝细胞增殖方面的研究。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种组合物、含有该组合物的细胞活性的检测试剂及细胞活性的检测方法。选择了合适的细胞株来研究药物对肝脏的作用。L02细胞是一种贴壁生长的人正常肝细胞，用L02正常肝细胞来验证药物对肝脏的作用，并建立了一种适合L02正常肝细胞的活性检测方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种组合物，由不含谷氨酰胺的RPMI-1640培养基和四季青的新生牛血清组成。

在本发明的一些具体实施方案中，四季青的新生牛血清与不含谷氨酰胺的RPMI-1640培养基的体积比为1：9。

本发明还提供了所述的组合物在制备细胞活性的检测制剂中的应用。

在本发明的一些具体实施方案中，所述细胞为L02人正常肝细胞。

在本发明的一些具体实施方案中，所述细胞为预防和/或治疗肝脏疾病的药物作用后的L02人正常肝细胞。

在本发明的一些具体实施方案中，所述药物为促肝细胞生长素肠溶胶囊。

在此基础上，本发明还提供了细胞活性的检测试剂，包括所述的组合物和制剂中可用的辅料。

本发明还提供了试剂盒，包括所述的检测试剂。

在本发明的一些具体实施方案中，所述试剂盒还包括胰蛋白酶－乙二胺四醋酸二钠消化液。

本发明还提供了所述的试剂盒在检测细胞活性中的应用。

在本发明的一些具体实施方案中，所述细胞为L02人正常肝细胞。

在本发明的一些具体实施方案中，所述细胞为预防和/或治疗肝脏疾病的药物作用后的L02人正常肝细胞。