[发明专利]一种牛脂肪细胞的microRNA及其应用

说明书

本发明涉及一种牛脂肪细胞的microRNA，该牛脂肪细胞的microRNA是bta‑miR‑33a，其序列为GUGCAUUGUAGUUGCAUUGCA，利用化学合成bta‑miR‑33a的mimic和NC。根据申请人的实验表明，bta‑miR‑33a的mimic抑制脂肪细胞的增殖分化过程。可以用于调控牛前体脂肪细胞增殖分化的应用。

技术领域

本发明属于分子生物学、细胞工程技术领域，具体地涉及一种牛脂肪细胞的microRNA及其用于调控牛前体脂肪细胞增殖分化的应用。

背景技术

牛肉具有很高的营养和经济价值，但中国牛肉品质相较于肉牛产业发达的国家还相差甚远。脂肪种类和数量是影响牛肉的品质，研究牛脂肪细胞的增殖分化分子水平的调控对肉牛改良育种提供新的思路。microRNA是一类内源性非编码RNA，片段长度为22个左右的核苷酸，主要功能通过作用于3’UTR区的对靶基因转录或转录后调控。一个miRNA可以靶向上成千上百个mRNA，并且影响很多在通路上功能互作的基因的表达。miRNAs生物功能包括调节细胞早起发育、细胞分化和组织发育、基因的表达、干细胞的自我更新，另外影响肿瘤、动物病毒性疾病发生目前miRNA的mimics和inhibitor在临床发展中具有成为治疗性新药的潜力。

Bta-miR-33a定位于固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)基因16号内含子区具有调节多种生命代谢的功能。研究发现miR-33在不同肝癌细胞系中表达不同，miR-33能够抑制SMMC-7721、Huh7细胞增殖和SMMC-7721迁移，表明其对肝癌细胞的增殖和迁移具有调控作用。miR-33另一重要功能是参与脂类代谢，miR-33通过上调靶基因SREBP1参与低密度脂蛋白受体、脂肪酸和胆固醇的合成，通过下调ABCA1基因调控细胞内胆固醇输出，还能参与脂肪酸在线粒体中的氧化。在小鼠上miR-33a可以通过靶向SIRT6来调控胆固醇的合成，而SIRT6对KIF5C有负调控，KIF5C与CK2α之间互作，阻碍了CK2α的核转运和它的酶活性，从而抑制脂肪分化过程中的有丝分裂过程，对脂肪细胞有负调控作用，表明SIRT6可以通过调控有丝分裂过程来参与脂肪细胞的分化，因此miR-33a可能通过靶向SIRT6基因能够参与脂肪细胞的增殖的过程。阉牛的脂肪沉积能力强于公牛，在秦川公牛和阉牛的miRNAs-mRNAs转录组分析发现，正常公牛的肌内脂肪的bta-miR-33a的表达量是阉牛中表达量的2.2倍，表明bta-miR-33a是潜在调控牛脂肪增殖分化的microRNA。因此研究bta-miR-33a对牛脂肪细胞增殖分化具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种牛脂肪细胞的microRNA及其采用该牛脂肪细胞的microRNA用于调控牛前体脂肪细胞增殖分化的应用。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种牛脂肪细胞的microRNA，所述的牛脂肪细胞的microRNA是bta-miR-33a，其序列为GUGCAUUGUAGUUGCAUUGCA，其特征在于，利用化学合成bta-miR-33a的mimic和NC。

根据申请人的实验表明，该牛脂肪细胞的microRNA可以用于调控牛前体脂肪细胞增殖分化的应用。

进一步地，所述的bta-miR-33a的mimic和NC用lip3000^TM转入到牛前体脂肪细胞。

优选的，利用对增殖标志基因mRNA、Edu染色和流式细胞检测验证bta-miR-33a的mimic和NC对牛前体脂肪细胞增殖的作用。

优选的，诱导脂肪细胞分化利用油红O染色验证对牛前体脂肪分化的影响。