[发明专利]一种检测人结肠癌的核酸适体及其在制备检测制剂中的应用

说明书

本发明公开了一种可靶向检测结肠癌细胞的核酸适体及其应用，该核酸适体的核苷酸序列为5’‑ACGCTCGGATGCCACTACAGGTTGGGGTCGGGCATG CGTCCGGAGAAGGGCAAACGAGAGGTCACCAGCACGTCCATGAG‑3’。本发明的核酸适体的稳定性好，能特异性识别靶标分子，在体内的免疫原性小，易于被排除。该适体分子量小，制备成本低，可通过体外化学合成得到，易于贮存和运输。采用本发明的核酸适体可以对多种结肠癌细胞进行检测，且操作简单、迅速，有助于结肠癌的早期诊断、靶向治疗及预后等。

技术领域

本发明涉及一种核酸适体及其应用，特别是涉及一种可用于人结肠癌细胞及临床样本组织检测的核酸适体及其制备检测试剂的应用方法。

背景技术

结直肠癌是一种恶性程度很高的消化系统肿瘤，其全球死亡率位于第三位。结直肠癌的发生与体外环境和体内因素有很大的关联。体外环境中的饮食习惯（如长期高热量、高脂肪饮食）和生活方式（如缺乏运动）都是导致结直肠癌发生的诱因。体内因素主要是与家庭遗传史有关，如家族性腺瘤性息肉病家系（FAP）、遗传性非息肉性结直肠癌家系（HNPCC）。随着经济飞速发展，人们的生活水平日渐提高，饮食习惯和生活方式随之发生改变，结直肠癌的发病率和死亡率也在逐年提升，每年约新增病例120万，且有60%发生于发达国家，发展中国家占新增病例的40%。在我国，结直肠癌的发病率和死亡率将比于上世纪90年代都有明显的提升。结直肠癌已成为威胁我国人民健康的重要肿瘤之一。

手术切除是目前结直肠癌治疗的首选方式，但是结直肠癌的肝转移会导致手术切除失败。约15%-20%的结直肠癌在进行第一次手术时已经发生肝转移，术后结直肠癌复发产生肝转移的概率约达50%。化疗是应对术后复发及产生转移性结直肠癌患者的主要治疗方法，但化疗缺乏靶向性，会对正常组织和细胞产生毒副作用。目前用于结直肠癌靶向治疗的药物主要包括伊立替康、卡培他滨、奥沙利铂、西妥昔单抗、帕尼单抗等，但某些基因突变的结直肠癌患者的靶向药物治疗效果不显著。

结直肠癌的疾病分期是最重要的预后因素。在美国，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期的结直肠癌患者5年生存率分别为90.1%、69.2%、69.2%、11.7%。Ⅰ期和Ⅳ期的结直肠癌患者术后生存率分别为90%和10%。因此，结直肠癌的早期筛查和治疗是治疗结直肠癌患者的重要方法之一。美国在2018年公布的癌症统计数据表明，美国结直肠癌死亡率在25年内下降了52%，主要得益于美国在这20年间进行的筛查。筛查在临床上主要是指在早期通过各类化学、影像等医学手段对将要发生或已经发生的疾病进行早期检查，进而在早期就对疾病进行治疗和控制，减少晚期病例，降低死亡率。但我国的肠镜筛查非常欠缺。一方面是由于大部分国民对于肠镜检查的意义并不重视和了解。另一方面，内镜检查是一种侵入性的检查方式，有一定的不适和并发症，让人产生畏惧心理，导致一些结直肠的疾病无法得到早期发现和确诊，错过了最佳治疗时期。综上，研发一种能靶向识别结直肠癌且能对结直肠癌进行早期识别的分子药物对于结直肠癌的筛查和治疗都具有重大的意义。

发明内容

本发明人利用实验室中的Swan Library（plos one,2014, 9(1): e87002-e87002）中的所有适体对人结肠癌细胞进行流式结合验证，最终得到可以与多种人结肠癌细胞（HCT116、HT29、LoVo 、Caco2、SW620、HCA7、DLD1）结合且不与人正常肠上皮细胞（FHs74Int、NCM460）结合的适体。因而，本发明的目的提供一种高度特异性、稳定性、可用于人结肠癌检测的适体及其在制备检测试剂中的应用方法。

本发明提供一种检测人结肠癌的核酸适体，其核苷酸序列如下所示：

5’-AGGTTGGGGTCGGGCATGCGTCCGGAGAAGGGCAAACGAGAGG-3’，或者在其两端分别增加1至20个碱基，或进行标记修饰。

优选地，其核苷酸序列如下所示：