[发明专利]抗对虾白斑病疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种抗对虾白斑病疫苗，其特征在于：其活性成分为氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白；是通过以下方法制备得到的：

（1）将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的合成基因与空白载体连接获得重组载体；

（2）将重组载体导入宿主，挑选转化成功的转化子，扩大培养，所得培养物中含有氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白。

2.权利要求1所述的抗对虾白斑病疫苗的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的合成基因Y1798G与空白载体连接获得重组载体；

（2）将上述重组载体导入宿主，挑选转化成功的转化子，筛选表达量高的菌株，扩大培养，所得培养物经常规方法处理即为抗对虾白斑病疫苗的有效成分。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述空白载体为载体PET-32a；获得重组载体的具体方法为：利用限制性内切酶NcoI、BamHI分别对合成基因Y1798G、空白载体PET-32a进行双酶切，然后连接，得到重组载体。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述双酶切体系如下：

合成基因Y1798G的体系：10×NEB buffer3.1，2 μl；Y1798G plasmid，15 μl；NcoI，0.5μl；BamHI，0.5 μl；ddH₂O，7 μl；37℃，温育2 h；

空白载体PET-32a的体系：10×NEB buffer3.1，2 μl；PET-32a plasmid，15 μl；NcoI，0.5 μl；BamHI，0.5 μl；ddH₂O，7 μl；37℃，温育2 h；

所述连接体系如下：10×T4 DNA连接反应缓冲液，2 μl；T4 DNA 连接酶，1 μl；带切口的载体PET-32a，4 μl；目的片段DNA，6 μl；灭菌水，7 μl；连接反应混合液于16℃反应30～50分钟，后置4℃备用。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，宿主为大肠杆菌；

所述步骤（2）中，将重组载体导入宿主的具体方法为：取重组载体，加入到BL21（DE3）感受态中，轻弹混匀，冰上放置30分钟，置42℃水浴中热激90 s，迅速转移至冰上放置3分钟，加入890 μl新鲜的soc培养基，37℃摇床培养1 h；取50 μl涂布于含有氨苄的平板上，倒置过夜培养；在含有氨苄的平板上生长的单菌落即为转化成功的转化子。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，扩大培养的具体方法为：

①挑取在含有氨苄的平板上生长的单菌落，于新鲜的含有氨苄的LB培养基上划线活化，37℃过夜培养，获得单克隆；

②挑取上述单克隆，接种于新鲜的含有氨苄青霉素的LB培养基中，37℃，220rpm培养5～6小时，使菌达到对数期；

③取上述培养到对数期的菌液，按照1%的接种量转接于新鲜的含有终浓度100 μg/ml氨苄青霉素、1%葡萄糖的LB培养基中，37℃，220 rpm培养2～3 h，待菌液OD₆₀₀达到0.6～1.0时，加入终浓度为0.1～1 mM的IPTG，20～40℃诱导培养3～30 h。