[发明专利]一种脱细胞神经基质及其制备方法

说明书

本发明涉及组织工程材料技术领域，具体涉及一种脱细胞神经基质及其制备方法，制备方法为：将神经组织依次通过低渗处理、胰蛋白酶处理、去污剂处理和核酸酶处理，制得神经基质，本发明制备的脱细胞神经基质能够最大限度地保留神经细胞基质本身的三维结构，具有良好的机械性能，而且不需要外加交联剂进行物理或者化学交联，免疫原性低、毒性低，而且制备方法简单，稳定可靠，成本较低，适宜产业化生产。

技术领域

本发明涉及组织工程材料技术领域，具体涉及一种脱细胞神经基质及其制备方法。

背景技术

神经系统是机体内对生理功能活动的调节起到主导作用的系统，主要由神经组织组成，分为中枢神经系统和周围神经系统两大部分，中枢神经系统又包括脑和脊髓，周围神经系统包括脑神经和脊神经。周围神经系统的主要功能是允许针对外部或内部刺激进行运动，感觉和行为改变。当周围神经断裂后，虽然近端神经有较好的再生能力，但由于原有通路的破坏，再生的神经纤维往往支配错误的靶器官，当运动神经纤维错误的支配肌肉会导致运动功能失调，再生的错误感觉神经纤维会导致异位感，自主神经的错接会导致植物神经功能紊乱。一般而言，在相对较短距离(小于5毫米)的外周神经损伤，轴突可以自发再生，但仍然很难达到功能完全恢复，在大于3cm的缺损中，神经修复过程中会发生神经错配。周围神经损伤是使人功能受损的常见创伤方式，影响约2.8％的创伤患者。目前，由于各种原因导致的周围神经损伤患者数量逐年增加，在中国，每年约有50余万人因创伤导致周围神经损伤，周围神经损伤常引起支配区域的感觉和运动功能障碍，而长时间的感觉或运动的缺失将引起肌肉萎缩、关节挛缩畸形等，影响患者生活质量，治疗费用较昂贵，但疗效不佳，给患者和社会带来了巨大的经济负担。周围神经缺损的修复治疗是临床工作中的一大难题,特别是>3cm的较长神经缺损。多年来临床医务工作者和科研人员对周围神经缺损的修复治疗进行了大量临床和实验研究，为周围神经损伤的修复提供了理论和实践基础。

脱细胞技术是脱除免疫原性的组织细胞保留细胞外基质的方法，相对于自体神经修复具有缺点，如可供神经移植的自体神经来源极其有限，会对患者造成二次损伤，供体部位发病率增加、供体部位发病率增加，疼痛，瘢痕形成，神经瘤形成和供体区域的感觉丧失等，利用脱细胞技术制备的异种脱细胞神经基质具有以下优点：(1)来源广泛，价格低廉。(2)保留了天然神经内存在的三维网络结构，细胞迁移和神经纤维伸长细胞外基质成分来引导，为轴突再生提供物理指导。(3)保留细胞外基质组分(胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白)等保留完整，纤连蛋白可以促进轴突生长和存活，也可做为细胞表面受体的配体，从而启动影响细胞行为和生存的信号，如细胞黏附、增殖、迁移、分化等。层粘连蛋白促进施万细胞生长，在周围神经修复中发挥作用。(4)经脱细胞处理后的异种神经基质除去了硫酸神经素蛋白多糖(CSPG)，研究表明，CSPG可以抑制轴突生长，因此从神经移植材料中去除CSPG可以促进神经修复，因此，脱细胞技术已成为神经组织修复中非常重要的研究方向和研究内容。

目前国内外常用到的脱细胞方法主要有机械法、酶消化法、化学去垢剂法等，然而在单独使用或者联合使用这些方法脱细胞的过程中容易出现细胞抗原性去除不彻底，细胞外基质的三维结构遭到破坏的问题，使得细胞营养供应以及代谢废物排出困难，影响神经修复效果，甚至导致神经修复失败。现有技术中，为了彻底地脱除神经细胞，主要采用先将神经粉粹或者研磨成微粒的方法，这就造成在后续处理中需要多次离心以及多次清洗，不仅加重了对细胞外基质的三维结构的破坏，导致脱细胞神经基质材料力学性能变差、机械强度降低。