[发明专利]使用含丙烯酰胺的过滤器分离蛋白

说明书

用于从含有感兴趣的蛋白(例如，抗体)的样品去除杂质(如蛋白聚集体)的新颖组合物。可以在蛋白纯化过程中的病毒过滤步骤之前使用这种组合物，以便去除聚集体且保护病毒过滤器免于淤塞，因此改进病毒过滤器容量。包括具有至少两种单体的共聚物的多孔固体支持物，其中所述单体中的至少一种包含丙烯酰胺且至少第二单体包含疏水性结合基团，其中所述固体支持物选择性结合蛋白聚集体，由此将感兴趣的单体蛋白与蛋白聚集体分离。可以在中性至高pH和高导电率条件下进行所述方法。

本申请是申请日为2014年11月6日、申请号为“201480067562.6”、发明名称为“使用含丙烯酰胺的过滤器分离蛋白”的申请的分案申请。

本申请要求2013年12月12日提交的美国临时申请序列号61/915,125的优先权，所述申请通过引用并入本文。

发明领域

本文公开的实施方案涉及使用含丙烯酰胺的过滤器从含有感兴趣的产物的生物药物制剂去除杂质(包括蛋白聚集体)的方法。

背景

用于蛋白纯化的常规方法通常涉及细胞培养方法，例如，使用经重组工程改造以产生感兴趣的蛋白(例如，单克隆抗体)的哺乳动物或细菌细胞系，随后为从细胞培养液移取细胞和细胞碎片的细胞收获步骤。细胞收获步骤通常随后为捕获步骤，其通常随后为一个或多个层析步骤，也称为精加工步骤(polishing steps)，通常包括阳离子交换层析和/或阴离子交换层析和/或疏水性相互作用层析和/或混合模式层析和/或羟基磷灰石层析中的一种或多种。在捕获步骤之后也可以包括病毒灭活步骤。抛光步骤通常随后为病毒过滤和超滤/渗滤，其完成纯化过程。参见，例如，Shukla等人, J. Chromatography B., 848 (2007)28-39; Liu等人, MAbs, 2010: Sep-Oct 2(5): 480-499。

病毒过滤步骤是蛋白纯化中的重要步骤，尤其是当期望产品用于诊断或治疗应用中时。病毒过滤步骤通常利用保留病毒颗粒、同时允许感兴趣的蛋白通过的病毒保留过滤器。实现有效的病毒过滤的挑战之一在于，一些杂质，尤其是蛋白聚集体，具有与病毒颗粒类似的大小。因此，蛋白聚集体最终淤塞或堵塞病毒保留过滤器，由此显著降低感兴趣的蛋白通过过滤器的流速。

杂质如蛋白聚集体在纯化过程的不同阶段形成，并且为了维持病毒保留过滤器的足够通量，需要在到达病毒保留过滤器之前去除蛋白聚集体。现有技术中已尝试实施基于疏水相互作用层析(HIC)介质的流通聚集体去除(参见例如美国专利号7,427,659)。但是，基于HIC的制备型分离具有窄应用性，这是因为通常方法开发难，操作窗口窄，并且缓冲液中所需的盐浓度高。

弱分配层析(WPC)是层析操作的另一种模式，其中产物结合比结合-洗脱层析情况下更弱，但比流通层析情况下更强(参见例如美国专利号8,067,182)；但是，WPC也具有与其相关的特定缺点，包括操作窗口窄和与结合-洗脱方法相比更低的杂质去除容量。

此外，选择性去除蛋白聚集体的最方便方式之一是通过使蛋白和/或其他生物分子的溶液在到达病毒保留过滤器前通过过滤介质，由此去除蛋白聚集体，允许所纯化的蛋白流过病毒保留过滤器。这种过滤器的实例可见于美国专利号7,118,675，其讨论在病毒过滤步骤前，使蛋白和病毒的溶液过滤通过吸附深度过滤器或带电荷或表面改性的膜。

此外，PCT公开号WO2010/098867讨论使用带负电荷的多孔介质用于去除蛋白聚集体，且PCT公开号WO2012/175156讨论基于聚酰胺的过滤器用于去除蛋白聚集体。最后，2013年3月4日提交的美国申请序列号13/783,941，US 20130245139 A1讨论使用包含阳离子交换基团的组合物用于去除蛋白聚集体，但是，其中描述的组合物仅在适合于阳离子交换层析的pH和导电率条件下操作良好。

概述