[发明专利]耐热磷酸化酶及其应用

权利要求书

1.一种全细胞催化剂，其特征在于，包括微生物，其中，所述微生物携带SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的核酸；

所述全细胞催化剂是通过如下方式制备得到的：

在适合微生物增殖的条件下，将所述的微生物进行预培养和发酵处理，

将发酵处理产物进行离心处理，以便获得离心沉淀物，所述离心沉淀物构成所述全细胞催化剂；

所述预培养和发酵处理是在温度28～35℃、转速为200～250rpm的条件下进行的；

所述预培养处理的时间为15～25小时；

预培养处理后，菌液的OD_600nm为20～25；

所述发酵处理的时间为45～55小时；

在预培养处理中，培养基包括：1.5～2.5％的酵母浸粉、0.3～0.8％的蛋白胨、0.05～0.15％的氯化钠、0.003～0.008％的七水硫酸镁、0.03～0.08％的磷酸二氢钾、0.10～0.20％的磷酸氢二钠、0.20～0.30％的蔗糖、0.001～0.003％的氯化钙、0.001～0.003％的七水硫酸锌、0.001～0.003％的七水硫酸亚铁以及余量的水；

在发酵处理中，培养基包括：2.5～3.5％的酵母浸粉、0.20～0.30％的蛋白胨、0.30～0.80％的氯化钠、0.005～0.015％的七水硫酸镁、0.20～0.30％的磷酸二氢钾、0.50～0.60％的磷酸氢二钠、0.005～0.015％的氯化钙、0.30～0.40％的蔗糖、0.20～0.30％的甘油、0.10～0.15％的乳糖以及余量的水；

预培养处理后、发酵处理前，进一步包括将预培养处理产物接种在发酵培养基中；

接种比为0.5～1.5％。

2.一种甘油葡糖苷的制备方法，其特征在于，包括：

将蔗糖以及甘油在权利要求1所述的全细胞催化剂的催化条件下进行脱水缩合反应，以便获得所述甘油葡糖苷。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述脱水缩合反应是在温度为50～60℃的条件下反应18～28小时；

所述脱水缩合反应是在柠檬酸三钠缓冲液存在的条件下进行的；

所述全细胞催化剂的浓度为50～150g/L，所述蔗糖的浓度为60～300g/L，所述甘油的浓度为20～150g/L。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述柠檬酸三钠缓冲液的pH为4.0～6.5。

5.SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的耐热蔗糖磷酸化酶、SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的分离的核酸、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的构建体、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的微生物或权利要求1所述的全细胞催化剂在制备甘油葡糖苷中的用途。

6.根据权利要求5中的用途，其特征在于，所述构建体的载体为pET-28A。

7.根据权利要求5中的用途，其特征在于，所述微生物为大肠杆菌；所述微生物为大肠杆菌BL21。